Analisis kualitatif untuk hepatitis C

Share Tweet Pin it

Tinggalkan komen 7,180

Analisis kualitatif tindak balas rantai polimerase - PCR untuk hepatitis C menentukan kehadiran atau ketiadaan HCV dalam badan. Dalam keadaan makmal, struktur RNA dipelajari, yang akan merangkumi virus. Dalam kes pengesanan virus C, perlu menjalani rawatan, kerana keadaan hati yang diabaikan akan menyebabkan akibat yang serius. PCR berkualiti tinggi juga dilakukan selepas pemulihan untuk mengesahkan ketiadaan antibodi. Ditugaskan untuk pemeriksaan rutin. Dengan kepekatan rendah agen penyebab dalam darah, PCR (kualitatif) tidak dapat mengesan apa-apa, kerana sistem diagnostik mempunyai ambang kepekaannya sendiri. Dalam kes peringkat awal penyakit atau bentuk ringan, PCR ultra diagnostik dilakukan pada peralatan ultra-sensitif.

Apakah virus RNA?

Istilah RNA virus hepatitis C (atau RNA virus hepatitis C) adalah penyakit hati itu sendiri. Virus C mengikat sel sihat tubuh dengan menembusi ke dalam. Lama kelamaan, tersebar di seluruh badan, hanya perlu masuk ke dalam darah. Akibatnya, patogen itu menembusi hati, bersatu dengan sel-selnya dan bekerja keras. Sel-sel hepatik (hepatosit) berfungsi di bawah pengaruhnya, menjalani perubahan, dan dari ini mereka mati. Semakin lama virus C berada di hati, semakin banyak jumlah sel mati. Dari masa ke masa, mengembangkan penyakit berbahaya yang membawa kepada kemerosotan ganas dan kematian.

Jangkitan hati dengan jenis virus ini mungkin tidak nyata secara luaran. Selama bertahun-tahun atau beberapa dekad, orang yang terinfeksi terasa sihat, dan hanya pemeriksaan rawak yang paling sering mendedahkan patologi. Apabila menderma darah untuk hepatitis, sebahagian daripada rantaian RNA (ribonucleic acid), yang merupakan sebahagian daripada gen manusia (DNA), diperiksa. Hasil ujian makmal tidak boleh digunakan untuk perawatan diri, karena ini hanya merupakan indikator. Gambaran yang tepat dan diagnosis lanjut adalah lebih baik ditentukan oleh doktor.

Apabila selesai: petunjuk untuk penyelidikan

Dalam pengesahan HCV, analisis PCR dilakukan (tindak balas rantai polimerase). Kajian PCR membantu untuk mencari bahan patogen dalam struktur RNA dan menetapkan terapi yang berkesan. Dilantik dalam kes berikut:

  • pengesanan tanda-tanda keradangan hati;
  • kajian skrining untuk pencegahan;
  • pemeriksaan orang yang dihubungi;
  • diagnosis hepatitis asal campuran (penentuan patogen utama);
  • menentukan tahap aktiviti pembiakan virus dalam bentuk kronik;
  • sirosis hati;
  • untuk menentukan keberkesanan rawatan yang ditetapkan.
Kajian PCR ditetapkan oleh doktor untuk menentukan keberkesanan rawatan untuk hepatitis.

Terdapat analisis kualitatif serta kuantitatif PCR. PCR kuantitatif menunjukkan nisbah peratusan RNA kepada pembawa virus dalam darah, dan kualitatif menunjukkan kehadiran atau ketiadaan virus. Penunjuk positif kualiti (kehadiran Hepatitis C RNA) juga memerlukan penyelidikan kuantitatif. Tahap kepekatan yang tinggi dari agen penyebab hepatitis C dikaitkan dengan risiko penghantarannya, iaitu, jangkitan orang lain. Tuduhan yang lebih rendah boleh dirawat dengan lebih baik. Jumlah virus RNA dalam darah tidak berkaitan dengan intensiti penyakit ini. Analisis PCR juga dilakukan dalam kes terapi interferon untuk menetapkan tempoh dan kerumitan kursus rawatan.

Ciri-ciri analisis PCR berkualiti tinggi untuk hepatitis C

Analisis kualitatif dengan indeks reaksi rantai polimer diberikan kepada semua pesakit yang mempunyai antibodi untuk hepatitis C dalam darah mereka. Mereka yang telah sakit dan sembuh harus mengambil ujian semula. Ia disyorkan untuk lulus ujian untuk hepatitis B, maka, jika kesimpulan positif, dan untuk hepatitis D. Juga, tindak balas kualitatif yang dianalisis harus dilakukan bersamaan dengan ujian darah yang lain. Analisis akan menunjukkan gambaran lengkap penyebaran virus.

Dari hasil ujian, hanya ujian positif untuk hepatitis C akan kelihatan atau negatif, iaitu kehadiran atau ketiadaan virus. Jika output "dikesan", maka virus itu dan terus aktif. Penetapan "tidak dikesan" menunjukkan ketiadaan virus atau jumlahnya yang kecil. Dengan penunjuk ini, perlu diingat bahawa sensitiviti analisis sistem diagnostik adalah berbeza dan bahawa hepatitis C RNA mungkin masih dalam darah, tetapi tidak ditunjukkan dalam analisis.

Kaedah PCR yang sangat sensitif ultra hepatitis C mendedahkan walaupun dalam jumlah yang sedikit. Kajian hibridensi fluoresen digunakan, yang banyak kali lebih tinggi daripada sistem PCR standard. Kaedah ini digunakan dalam beberapa kes:

  • disyaki bentuk tersembunyi hepatitis C;
  • Diagnostik PCR tidak mengesahkan patogen, tetapi terdapat antibodi;
  • dalam kes pemulihan;
  • untuk mengesan jangkitan awal.
Kembali ke jadual kandungan

Analisis penyahkodan

Penyahkodan PCR HCV mempengaruhi keputusan muktamad ketika membuat diagnosis, khususnya dengan metode ultrametod. Kelemahan utama kajian ini adalah pematuhan ketat kepada keadaan steril untuk sampel dan bahan. Penyimpangan sedikit kadang-kadang menunjukkan kesimpulan analitis yang tidak tepat, merumitkan diagnosis dan rawatan berikutnya. Analisis PCR untuk menentukan RNA hepatitis tidak senantiasa menunjukkan gambaran penyakit, kadang kala ketidakakurasian dibenarkan, dan di kedua-dua arah.

Mendiagnosis virus hepatitis, disyorkan untuk menggunakan peperiksaan yang komprehensif.

Norma petunjuk

Ketiadaan antibodi JgM terhadap hepatitis C virus dalam hasil kajian dianggap sebagai norma dalam analisis reaksi rantai polimerase. Pada masa yang sama, penemuan analisis serologi menunjukkan kehadiran antibodi kepada virus C dan ini juga berada dalam jarak normal. Takrif kualitatif tidak menunjukkan keamatan penyakit, ia hanya mendedahkan agen penyebab hepatitis C dalam RNA. Analisis ini diulangi selepas rawatan untuk mengesahkan pemulihan sebenar.

Penyimpangan

Sekiranya antibodi JgM ke RNA HCV hadir, ini menunjukkan jangkitan yang membina. Penyakit ini pada masa yang sama meneruskan akut atau kronik, yang ditunjukkan dalam pelbagai peringkat. Sekiranya penurunan jumlah antibodi dicatatkan, analisis akan menunjukkan bahawa hasil rawatan dicapai semasa pemulihan. Hanya kes-kes palsu yang positif yang jarang ditemui dalam diagnosis. Mereka ditemui pada wanita semasa kehamilan dan pada orang dengan penyakit berjangkit lain.

Diagnosis dengan PCR untuk Hepatitis C

Tidak semua orang tahu mengapa mereka menggunakan kaedah diagnostik PCR untuk hepatitis C. Salah satu kumpulan penyakit yang paling meluas adalah penyakit berjangkit saluran gastrousus. Selalunya, perut (ulser), usus (kolitis, enteritis) dan hati (hepatitis) menderita.

Di antara semua organ yang disenaraikan di atas, beban terbesar dikenakan pada hati. Di dalam badan, peranan hati sangat penting:

  1. Hampir semua tindak balas metabolik berlaku di hati (ini adalah di mana semua jenis komponen penting dibentuk yang membolehkan tubuh berfungsi sepenuhnya).
  2. Hati adalah organ detoksifikasi utama. Dengan bantuannya (khususnya, melalui hempedu), banyak substrat dikeluarkan yang boleh menyebabkan mabuk dan membawa kepada akibat yang serius.

Malangnya, ramai yang tidak memantau kesihatan mereka, kerana apa yang dideritakan oleh hati. Hepatitis pelbagai etiologi (virus, toksik) biasanya berkembang.

Definisi hepatitis

Hepatitis virus menduduki tempat yang penting di kalangan penyakit hati. Keparahan penyakit ini, kerumitan rawatan meletakkannya di tempat pertama di kalangan patologi organ lain dari organ ini.

Semua hepatitis dibahagikan kepada akut dan kronik. Hepatitis A dan B dikelaskan sebagai akut. Antara hepatitis C kronik datang dahulu.

Penyakit ini disebabkan oleh virus hepatitis C. Ciri ciri adalah bahawa penyakit ini boleh bertahan lama tanpa sebarang manifestasi klinikal.

Ia disebarkan terutamanya melalui darah. Dengan aliran darah, virus memasuki hati, di mana ia mula melipatgandakan dalam sel-selnya. Akibat pengumpulan virion, kemusnahan hepatocyte yang dijangkiti berlaku. Sebagai tindak balas, antibodi mula dihasilkan, yang mula menyerang jenazah hepatosit. Oleh kerana itu, kolam terhadap sel hati dikembangkan dari masa ke masa, yang memperburuk perjalanan penyakit.

Disebabkan fakta bahawa penyakit ini adalah gejala asimtomatik atau asimtomatik, dan tanda-tanda klinikal hanya muncul dengan kerosakan sel yang signifikan, penyakit ini memerlukan penciptaan kaedah diagnostik untuk mengesan kehadirannya dan mengambil langkah yang sesuai.

Diagnosis hepatitis C: analisis kualitatif dan kuantitatif

Pada masa ini, untuk diagnosis hepatitis C menggunakan kaedah seperti biopsi hati, immunogram.

Mereka membolehkan anda untuk menentukan secara langsung kehadiran hepatosit yang dijangkiti (spesimen biopsi hati) atau antibodi tertentu terhadap sel-sel yang terjejas (immunogram). Walau bagaimanapun, terdapat satu kaedah yang membolehkan anda dengan pasti menentukan kehadiran virus itu sendiri. PCR ini adalah tindak balas rantai polimerase.

Inti kaedah ini terletak pada hakikat bahawa dalam keadaan tertentu, pengeluaran rantai RNA berlaku. Ini disebabkan oleh fakta bahawa terdapat serpihan zarah virus dalam darah atau biopsi yang dipersoalkan. Apabila menyambungkannya dengan beberapa molekul dalam medium, sintesis rantai yang saling melengkapi dengan RNA virus berlaku. Dalam analisis dan perbandingannya yang berikutnya dengan urutan nukleotida yang diketahui virus hepatitis C, adalah mungkin untuk menentukan sama ada virus itu terdapat di dalam badan dan sama ada kerosakan hati hadir.

PCR dilakukan selepas pengesanan antibodi spesifik dalam darah terhadap virus hepatitis. Selepas ujian, hasilnya dibuat - RNA "dikesan" atau "tidak dikesan". Kadang-kadang dia mungkin mengatakan "bahan tidak cukup" - dalam kes ini, perlu mengulangi analisis untuk hepatitis C.

Sekiranya bilangan zarah virus adalah kurang daripada jumlah minimum yang diperlukan, maka kita boleh mengatakan bahawa tidak ada hepatitis, dan jumlah bahan genetik yang minima boleh "keliru" kerana meniru bahan genetik atau beberapa urutan nukleotida yang dapat bertepatan dengan virus tersebut.

  1. Dengan PCR, keputusan negatif dapat dilihat apabila terdapat zarah virus dalam darah, tetapi mereka sangat kecil (jangkitan berlaku baru-baru ini atau analisis didahului oleh terapi antivirus jangka panjang dan intensif) bahawa sistem ujian tidak dapat menentukan konsentrasi mereka dengan tepat. RNA - "tidak dikesan."
  2. Jika PCR mempunyai hasil yang positif, maka terdapat begitu banyak zarah virus dalam darah yang jumlah mereka melebihi ambang kepekaan yang rendah dalam sistem ujian. Dalam kes ini, terdapat risiko tinggi untuk membangunkan proses menular (atau sudah ada dalam tahap yang agak maju). Biasanya, sejumlah besar virus sudah menjadi petunjuk untuk rawatan dan pemindahan hati seterusnya.

Kadang-kadang ujian boleh menjadi negatif palsu atau palsu.

Hasil PCR negatif palsu terhadap hepatitis diperhatikan apabila terdapat beberapa komponen dalam medium reaksi yang menghalang pembentukan salinan zarah virus. Oleh kerana itu, tidak mungkin untuk mendapatkan gambaran sebenar keadaan darah, yang menyumbang kepada laluan virus dan perkembangan penyakit. Kehadiran heparin dalam darah juga boleh mempengaruhi reaksi (dengan mengurangkan kelikatan relatif darah). Tafsiran yang tidak betul mengenai analisis itu adalah mungkin walaupun keadaan pengangkutan dan penyimpanan bahan yang diselidiki tidak dipenuhi.

Keputusan positif palsu, apabila hepatitis C didiagnosis, PCR paling kerap berlaku apabila tiub atau persekitaran kerja tercemar. Di samping itu, hasil positif dapat dilihat dengan adanya kumpulan virus hepatitis lain (akibat tindak balas silang).

Analisis kualitatif PCR untuk pengesanan hepatitis C

Kehadiran dalam darah sejumlah besar cryoglobulins juga secara langsung memberi kesan terhadap pengaliran PCR. Oleh kerana itu, penting untuk menentukan kepekatan mereka dalam darah sebelum menguji hepatitis C untuk mengesan penyimpangan hasil terlebih dahulu dan mencegahnya.

Selepas ujian ini, ia menjadi jelas sama ada terdapat zarah virus dalam darah. Apabila menentukan mereka, adalah disyorkan untuk segera memulakan terapi antiviral untuk memperlahankan proses perkembangan. Tidak seperti hepatitis B, tiada ubat lengkap untuk hepatitis C; penyakit itu hanya akan masuk ke peringkat laten dan mula berjalan lebih perlahan. Kerosakan hati tidak dapat dielakkan. Pada peringkat terakhir proses ini, apabila hati tidak lagi dapat menangani fungsinya, mungkin diperlukan untuk pemindahannya.

Rawatan ini dijalankan dengan dua ubat - interferon dan ribavirin.

Membuktikan keberkesanannya dalam memperlambat proses kekalahan hepatosit. Sepanjang perjalanan, terapi infusi semestinya ditetapkan untuk memudahkan kerja hati.

Semua pesakit yang telah melihat peningkatan jumlah zarah virus dalam darah semestinya didaftarkan dengan pakar hepatologi. Beberapa kali dalam setahun, mereka disyorkan untuk menjalani pemeriksaan pencegahan untuk menentukan perkembangan proses dan pengesanan indikasi untuk transplantasi tepat pada masanya. Di samping itu, ia mungkin menggunakan hepatoprotectors, walaupun pendapat doktor berbeza sedikit. Sesetengah percaya bahawa ubat-ubatan ini membolehkan anda untuk menggantung proses dan melindungi hepatosit yang tidak terjejas; yang lain yakin bahawa tidak masuk akal untuk mengambilnya, dan terapi antiviral intensif perlu dijalankan.

Oleh itu, hepatitis C tergolong dalam kategori penyakit, pengenalan yang memberikan beberapa masalah. Meningkatkan kaedah diagnostik, serta pemeriksaan pencegahan yang tepat pada masanya akan mengurangkan kejadian penyakit ini. Penting adalah pencegahan penyakit ini. Seseorang harus berhati-hati mengelakkan sentuhan dengan darah, enggan mengambil dadah, hanya penyakit ini akan dibasmi. Perkara utama dalam pencegahan dan rawatan adalah sikap pesakit terhadap kesihatan mereka.

Pengkodan analisis PCR untuk hepatitis C

Kajian makmal khas - analisis PCR untuk hepatitis C - sangat memudahkan diagnosis penyakit virus ini. Hepatitis C tidak terkecuali. Contoh kecil darah boleh diuji untuk kandungan rna dan bahan genetik lain dari agen virus. Semua individu yang mempunyai antibodi untuk hepatitis C yang beredar dalam plasma darah tertakluk kepada analisis dengan PCR, kehadirannya mengesahkan pengesanan kualitatif.

Tafsiran hasilnya ditafsirkan dalam lajur borang penyelidikan sebagai analisis "positif" atau "negatif". Di samping itu, menggunakan PCR adalah mungkin bukan sahaja untuk menentukan kandungan virus minimum, tetapi juga untuk mengira bilangan zarah. Oleh itu, adalah mungkin untuk menentukan anggaran beban viral dan menentukan taktik rawatan perubatan setepat mungkin.

Kerosakan hati virus

Hati sebagai unsur saluran pencernaan memerlukan beban besar. Di dalam sel-selnya, kebanyakan tindak balas metabolik semua jenis metabolisme berlaku, yang memastikan fungsi optimum semua organ dan sistem. Pada masa yang sama, nilai detoksifikasi sangat baik untuk mengeluarkan produk slug dan metabolik dengan hempedu enzim.

Kekalahan hati oleh virus yang berlainan sifatnya sangat berbahaya bagi tubuh. Gambar klinikal yang pelbagai dan ketidakpatuhan rawatan membawa hepatitis ke tempat pertama dari segi risiko kesihatan. Hepatitis C adalah kronik dan boleh menjadi negatif untuk masa yang lama, perlahan-lahan parasitizing dalam tubuh manusia. Virus ini ditularkan melalui cecair biologi: darah dan kurang kerap melalui air mani. Penyalahgunaan dadah suntikan tidak steril, penghantaran semula jadi wanita yang dijangkiti, kecederaan akibat kemalangan atau luka oleh pekerja kesihatan boleh menyebabkan penyebaran virus kepada orang yang sihat.

Diagnosis tepat pada masanya penyakit itu terhalang oleh gambaran klinikal yang tersembunyi dan patologi tidak sistematik. Keputusan positif hanya boleh dilewatkan oleh analisis prestasi yang kurang baik. Hanya kerosakan yang ketara terhadap sel-sel hati yang menyebabkan simptomologi tertentu, bagaimanapun, kesan negatif viremia pada masa itu tidak memberi peluang untuk memulihkan organ.

Perubatan moden telah membangunkan kaedah khas untuk mengenali kesan-kesan kecil virus itu. PCR, IFA, biopsi hati dapat mengesan kerosakan sedikit pada hati dan tahap antibodi minimum terhadap virus. Analisis dengan bantuan PCR adalah yang paling mudah dan paling dipercayai dalam amalan diagnostik.

Analisis kualitatif

Inti dari tindak balas polimerase ialah penjanaan urutan rna. Reaksi dilakukan dengan kehadiran protein virus yang sama dalam plasma darah.

Pemangkin khas membolehkan anda mensintesis urutan virus yang sama rantai, yang dibandingkan dengan nukleotida RNA virus yang diketahui. Berdasarkan ini, mereka menentukan beban virus dan kerosakan hati.

PCR mampu menangkap walaupun satu kehadiran gen yang dikehendaki dalam darah yang diambil. Reaksi rantai diagnostik sedemikian juga sangat spesifik. Urutan rantaian nukleotida adalah unik untuk setiap makhluk, sehingga primer enzimatik menghasilkan urutan yang sama dari maklumat genetik yang dikehendaki. Oleh itu, sebarang virus dapat dikesan dengan ketepatan yang sedikit, walaupun indikator kuantitatifnya sangat kecil.

Pesakit yang darahnya dijumpai antibodi yang dihasilkan terhadap hepatitis virus, menjalankan kajian kualitatif PCR atau Eph. Hasil analisa dapat bersifat positif dan negatif, yang kedua-dua kes memerlukan rawatan.

Tanggapan positif tindak balas rantai perlu diuraikan sebagai kehadiran serpihan RNA virus hepatitis atau sebagai fenomena jangkitan.

Dalam plasma darah pada masa ini virus secara aktif mengalikan dan parasit ke atas sel-sel hati. Diagnostik PCR boleh memberi jawapan negatif jika terdapat beberapa zarah RNA virus yang ada di plasma, di bawah tahap kepekaan ujian, atau tidak sama sekali. Selepas jangkitan langsung, jumlah virus tumbuh agak perlahan, dan hanya selepas 1-2 minggu, ifa atau penyelidikan kualitatif lain dapat mengasingkannya.

Analisis negatif boleh didapati dalam kes berikut:

  1. Apabila mengambil bahan dalam keadaan yang tidak wajar, dapatkan sampel darah dengan pencemaran;
  2. Apabila pesakit sebelum ini menerima suntikan heparin.
  3. Dengan kehadiran enzim dan substrat lain dalam sampel yang diambil yang mengganggu tindak balas rantai.

Analisis kuantitatif

Ujian kuantitatif sebagai diagnosis mikrobiologi direka untuk menentukan beban virus. Analisis kualitatif yang disahkan untuk viremia berfungsi sebagai asas untuk menentukan jumlah bahan genetik dan kepekatannya. Bilangan rna virus yang dikesan ditentukan dalam unit jumlah darah, biasanya dalam 1 mililiter. Bahan yang diperlukan dinyatakan dalam unit antarabangsa, sesetengah makmal menggunakan bilangan salinan dalam analisis eif.

Biasanya, sebelum sebarang regimen terapeutik, PCR dianalisis secara kuantitatif. Mengira rna virus dilakukan dengan kerap: selepas satu, empat, dua belas dan dua puluh empat minggu. Minggu ke-12 dianggap sebagai petunjuk, sejak berdasarkan analisis, dalam tempoh ini tafsiran keberkesanan langkah-langkah terapeutik dijalankan.

Analisis Kuantitatif menggunakan PCR atau IFA melibatkan mengambil sampel dari vena.

Tafsiran hasil sebagai beban virus tinggi bermula dari angka 800,000 IU / ml. Hasil positif seperti hepatitis C mencerminkan kehadiran sekurang-kurangnya 3,000,000 salinan per mililiter darah. Tahap rendah viremia berhenti pada 400,000 IU / ml. Hasil kajian boleh menjadi nilai sebagai respon negatif, serta penunjuk "di bawah julat ukur."

Ujian kuantitatif dengan anggaran "di bawah julat ukuran" mengatakan bahawa semasa reaksi, tidak mungkin untuk mengira RNA. Virus ini masih beredar di dalam badan, seperti ditunjukkan oleh ujian kualitatif yang positif. Penunjuk negatif analisis kuantitatif pcr atau ifa menunjukkan ketiadaan rna dalam sampel darah ini.

Walaupun terdapat kaedah penularan virus yang terhad melalui darah, risiko penularan virus melalui rembesan kelenjar seks dari ibu kepada anak meningkat.

Analisis kuantitatif memberi bantuan penting dalam menilai campur tangan terapeutik. Ifa dan PCR mencerminkan tindakan ubat-ubatan antiviral, membantu menentukan masa terapi dan menilai pembentukan imuniti pesakit. Sambutan negatif awal ujian makmal menunjukkan rawatan yang berjaya dan keperluan untuk mengurangkan tempoh terapi. Kemerosotan kemerahan dalam viremia dapat ditafsirkan sebagai keperluan untuk mengubahsuai kursus terapeutik. Tahap viral load menentukan prognosis penyakit. Hepatitis dengan kadar yang rendah mungkin dirawat dan virus itu dapat dikeluarkan sepenuhnya dari badan. Kadar tinggi kehadiran virus dalam darah memerlukan perhatian yang teliti dan rawatan serba boleh.

Penggunaan diagnostik PCR

Reaksi rantai polimerase (PCR) dalam biologi molekular adalah kaedah eksperimen untuk mengesan virus. Ia membolehkan anda meningkatkan ketumpatan kepekatan sesetengah asid nukleik tertentu (DNA) dalam sampel bahan biologi, yang membolehkannya menentukan (mengenali) dan menghitung.

Analisis dilakukan seperti berikut. Bahan genetik (sampel darah), yang boleh merangkumi gen yang dikehendaki, dimasukkan ke dalam tiub. Terdapat juga primer yang ditempatkan - segmen-segmen kimia yang disintesis daripada panjang kecil gen yang dikehendaki.

Polimerase DNA atau RNA juga ditambah ke dalam vesel, ia dapat menyusun rantai asid nukleik yang sama sekali sama dengan yang asal. Komposisi yang dihasilkan disuntik dan satu set empat nukleotida bebas - bahan bangunan khusus untuk RNA atau DNA, salah satunya mengandungi zarah fosforus radioaktif.

Campuran yang dihasilkan dipanaskan hingga 95-96 ° C, itulah sebabnya dua heliks DNA, yang biasanya saling berkaitan, ditenun. Kemudian ubat disejukkan, pada masa yang mana primers itu sendiri melekat pada kawasan genom virus yang dikehendaki, menghalang RNA (atau DNA) daripada membentuk helix ganda lagi.

Dalam proses penyejukan, polimerase mencari rantaian nukleotida bebas. Untuk fungsi enzim ini diperlukan satu rangkaian nukleotida. Kerana polimerase tergelincir di sepanjang rantaian DNA (seperti cincin pada tali), ia tidak dapat berfungsi pada heliks ganda.

Selepas ini, kitaran pemanasan berulang dilakukan, kerana rangkaian nukleotida dipisahkan. Di setiap kitaran PCR ini, amaun dalam sampel gen yang dikehendaki dari hepatitis meningkat secara eksponen, dan selebihnya bahan genetik dihasilkan (tumbuh) secara linear.

Selepas pembersihan penyelesaian daripada residu nukleotida dan pemisahan oleh elektroforesis rantai DNA dengan parameter berat molekul, seseorang dapat menentukan sama ada terdapat gen yang dikehendaki dalam sampel yang di bawah kajian atau tidak.

Faedah PCR

Ujian makmal menggunakan PCR membolehkan lebih banyak maklumat diperoleh daripada kehadiran virus RNA. Dengan menentukan parameter tahap radiasi radioaktif, adalah mungkin untuk mengenal pasti berapa banyak bahan genetik yang asalnya terkandung dalam sampel yang di bawah kajian. Dalam kes hepatitis, tentukan penunjuk paras viral load.

Satu lagi kelebihan kaedah ini adalah tahap kepekaan sensitiviti CR yang sangat tinggi. Ia lebih tinggi daripada kaedah klasik untuk mengesan virus. Idealnya, untuk mengenal pasti gen yang dikehendaki, untuk PCR, hanya satu virus dalam sampel yang mencukupi.

Di samping itu, PCR adalah benar-benar khusus. Primernya direka sedemikian rupa sehingga mereka sepenuhnya sesuai dengan kawasan unik gen-gen yang dikehendaki yang tidak ada urutan lain. Seperti cap jari yang unik, terdapat urutan nukleotida unik dalam setiap gen.

Analisis kualitatif PCR

Analisis kualitatif membolehkan anda mengenalpasti hanya kehadiran virus dalam darah. Ujian ini harus dijalankan untuk semua pesakit di mana antibodi untuk hepatitis C ditemui di dalam darah. Ia boleh mengakibatkan hanya satu daripada dua nilai: "dikesan" atau "tidak dikesan." Dalam orang yang sihat, norma (nilai rujukan) harus "tidak dikesan".

Terdapat penafsiran khas mengenai hasil penyelidikan kualitatif tersebut:

  • Hasilnya "dikesan." Ini bermakna bahawa serpihan RNA yang spesifik untuk virus hepatitis C didapati dalam sampel dianalisis bahan biologi yang diambil. Akibatnya, terdapat fakta bahawa pesakit itu dijangkiti virus hepatitis C. dan pada masa ini ia menjangkiti sel hati baru di dalam badan.
  • Hasilnya "tidak dikesan." Keputusan sedemikian menunjukkan bahawa dalam sampel dianalisis bahan biologi yang diperolehi di makmal ini, tidak ada serpihan RNA yang didapati khusus untuk virus hepatitis C. Selain itu, kepekatan RNA dari jangkitan patogen dalam sampel ini adalah di bawah had kepekaan ujian.

Dalam fasa akut RNA virus hepatitis C, kajian kualitatif oleh kaedah PCR boleh dikesan selepas 1-2 minggu selepas jangkitan badan, iaitu sebelum penampilan antibodi ke hepatitis itu sendiri.

Keputusan ujian yang tidak tepat dalam kajian ini boleh didapati dengan:

  • biomaterial tercemar;
  • kehadiran heparin dalam darah pesakit;
  • kehadiran dalam sampel bahan kimia atau protein (perencat) yang mempengaruhi pelbagai komponen PCR.

Untuk melakukan analisis kualitatif PCR, tidak ada penyediaan khusus pesakit untuk kajian ini diperlukan. Darah Venous digunakan sebagai bahan.

Penilaian keputusan

Ujian PCR berkualiti tinggi mempunyai sensitiviti tertentu, dan bergantung kepada ketepatan penyelidikan dan tahap peralatan di makmal boleh berbeza-beza dari 10 hingga 500 IU / ml.

Ini bermakna jika virus dalam sampel darah hadir dalam kepekatan yang sangat rendah (kurang daripada nilai ambang kepekaan makmal ini) maka hasilnya boleh ditentukan sebagai "tidak dikesan" dalam pesakit pesakit. Oleh kerana itu, apabila melakukan analisis kualitatif PCR dengan tingkat rendah viremia (kepekatan virus rendah), misalnya, untuk pesakit yang menjalani terapi antiviral, sangat penting untuk mengetahui ambang kepekaan sistem diagnostik ini.

Varian sistem diagnostik

Untuk mengawal tindak balas virologi, disyorkan untuk menggunakan sistem diagnostik dengan ambang kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml untuk rawatan antiviral. Kriteria ini dipenuhi, contohnya dengan analisa Cobas Ampicolor HCV-Test (tepat kepada 50 IU / ml), serta RealBest HCV RNA (dengan kepekaan 15 IU / ml).

Menurut cadangan WHO, untuk menubuhkan diagnosis definitif hepatitis C, hanya perlu berdasarkan asas pengesanan tiga kali RNA virus C pada sampel serum pesakit, dengan ketiadaan penanda hepatitis lain.

Sebagai tambahan kepada kaedah PCR, ujian TMA (kaedah penguatan transkripsi) juga digunakan untuk mengesan RNA HCV pada pesakit. Ia mempunyai ambang kepekaan yang terbaik (5-10 IU / ml), tetapi di negara kita seperti kaedah ujian belum lagi biasa.

Julat pengubahsuaian virus yang dapat dikesan

Seperti penentuan kualitatif dalam serum kehadiran RNA virus hepatitis C memungkinkan untuk menentukan beberapa genotip virus ini. Pada masa ini, sains tahu lebih daripada enam genotip virus ini, serta kira-kira 10 subtipe penyakit ini.

Di negara kita, virus biasa 1, 2, 3 genotip. Makmal dapat mengesan genotip berikut: 1a dan 1b, 2a, 2b dan 2c, serta 3, 4, 5a dan 6, tanpa mengira subtipe. Untuk semua modifikasi virus, spesifikasi pengesanan adalah 100%.

Analisis Kuantitatif PCR

Dengan bantuan ujian PCR kuantitatif, tahap kepekatan virus hepatitis dalam sampel darah (viral load) ditentukan. Ujian ini untuk viremia (kepekatan virus) membolehkan anda menentukan bilangan unit bahan genetik tertentu (RNA yang paling virus), yang dikesan dalam jumlah tertentu. Dalam kes ini, tentukan kepekatannya dalam 1 ml, yang sepadan dengan 1 cu. lihat

Parameter kuantitatif analisis dinyatakan dalam angka, untuk tujuan ini unit antarabangsa (IU) per mililiter (ml), yang disebut sebagai IU / ml, digunakan sebagai unit pengukuran. Sekarang dalam sesetengah makmal, jumlah virus boleh ditentukan dalam unit lain: bilangan salinan per ml ditunjukkan sebagai salinan / ml.

  • Tarikh untuk hepatitis C, analisis kuantitatif PCR yang dilakukan sebelum rawatan bermula. Kemudian pada minggu ke-1, ke-4, ke-12 dan ke-24. Penilaian pada minggu ke-12 adalah petunjuk, ia membolehkan untuk menentukan keberkesanan terapi.
  • Penyediaan untuk analisis. Untuk menjalankan analisis kuantitatif PCR, tiada persediaan khusus pesakit untuk kajian diperlukan. Setengah jam sebelum pensampelan tidak sepatutnya merokok. Darah Venous digunakan sebagai bahan makmal.

Penilaian keputusan

Bagi sistem ujian makmal yang berbeza, terdapat faktor penukaran yang berbeza untuk penunjuk ini dalam IU / ml. Secara purata, mereka mengambil parameter penukaran, di mana 4 salinan / ml = 1 IU / ml. Sebagai contoh, jika makmal memberi hasil analisis PCR 2.4 * 10 6 salinan / ml, maka parameter ini hendaklah dibahagikan kepada 4 dan kita akan mendapat 6 * 10 5 IU / ml.

Beban 800,000 IU / ml dianggap tinggi, kira-kira 3,000,000 salinan / ml. Viremia rendah, menurut beberapa pengarang, sesuai dengan parameter PCR kuantitatif di bawah 400,000 IU / ml.

Hasil daripada ujian kuantitatif, keputusan akhir dapat disampaikan bukan dalam bentuk nilai digital, tetapi: "di bawah julat ukur", atau "tidak dapat dikesan".

  • Penilaian: "di bawah julat ukuran." Ini menunjukkan bahawa ujian kuantitatif tidak dapat mengesan RNA virus hepatitis C, tetapi virus itu sendiri terdapat di dalam badan dalam kepekatan yang sangat rendah. Ini terbukti dengan ujian kualitatif tambahan, mengesahkan fakta kehadiran virus itu.
  • Penilaian: tidak dikesan. Keputusan ini menunjukkan bahawa ujian kuantitatif tidak terdapat dalam sampel RNA virus.

Parameter beban virus, pertama sekali, menentukan tahap jangkitan penyakit, tahap "jangkitan" pesakit. Semakin tinggi kepekatan virus pesakit, semakin besar peluangnya untuk lulus kepada orang lain. Misalnya, semasa hubungan seks dengan orang yang sakit, atau secara menegak. Penunjuk kuantitatif ini juga membantu menentukan keberkesanan rawatan pesakit.

Mengendalikan analisis kuantitatif CCP adalah penting untuk terapi antiviral, menilai kejayaannya dan merancang tempoh kursus. Oleh itu, dengan tindak balas yang cepat terhadap badan untuk rawatan dan tahap viremia yang rendah, tempoh terapi mungkin dipendekkan.

Sekiranya parameter PCR kuantitatif perlahan dikurangkan, terapi antiviral perlu dipanjangkan atau diubah suai. Sekiranya tahap beban virus adalah rendah, maka ini adalah faktor yang menggalakkan untuk terapi, tetapi jika dinaikkan, maka kaedah rawatan yang digunakan tidak berkesan dan ubat-ubatan atau kaedah penggunaannya harus diubah.

Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

Hepatitis adalah penyakit serius yang mempunyai banyak sebab. Asas pembangunannya adalah kerosakan langsung atau tidak langsung kepada hati. Memandangkan kepentingannya untuk seluruh organisma, seseorang hanya boleh meneka betapa sukarnya patologi itu. Dalam artikel ini kita akan mengkaji secara terperinci ciri-ciri kursus dan diagnosis makmal hepatitis C.

Penyebab penyakit itu adalah agen virus yang merujuk kepada patogen yang mengandungi RNA. Ia mempunyai ciri tersendiri - keupayaan untuk bermutasi, iaitu mengubah strukturnya. Disebabkan ini, jangkitan itu melarikan diri daripada serangan sistem imun dan dalam kebanyakan kes menyebabkan keradangan kronik di hati.

Memandangkan kewujudan subtipe yang berlainan virus, pemilihan ubat-ubatan harus berdasarkan hasil genotip. Walaupun kajian lama penyakit dan struktur HCV, belum ada kemungkinan untuk mengembangkan vaksin tertentu untuk penyakit ini.

Kesukaran diagnosis awal terletak pada kursus asimtomatik hepatitis, akibatnya seseorang melawat doktor pada tahap sirosis. Untuk mengesan penyakit itu dalam masa, pemeriksaan perubatan yang kerap diperlukan. Hanya dengan ujian makmal darah adalah mungkin untuk mengesan HCV dan mencegah pencemaran orang lain. Hakikatnya ialah pembawa jangkitan itu boleh lama tidak meneka tentang patologi dan terus menghantar virus kepada orang yang sihat.

Cara penghantaran

Dalam kebanyakan kes, virus merebak melalui darah, kerana ia mengandungi kepekatan tertinggi agen patogenik. Oleh itu, jangkitan disebarkan:

  • dengan hemodialisis;
  • dengan jarum yang dijangkiti;
  • dalam proses berperang, apabila kulit cedera, dan kontak darah berlaku;
  • dengan pemindahan darah (transfusi darah).

Kebarangkalian jangkitan semasa keintiman tidak signifikan, kerana air mani dan pelepasan vagina mengandungi sejumlah kecil patogen. Risiko jangkitan meningkat dengan ketara sebagai melanggar integriti membran mukus alat kelamin. Ini diperhatikan dengan seks yang agresif dan dubur.

Bagi mod penghantaran menegak, ia dijalankan dalam proses buruh. Dalam tempoh kehamilan janin, patogen tidak boleh menembusi plasenta ke embrio. Dalam kelahiran semulajadi, agen patogenik ditularkan kepada kanak-kanak apabila kulit cedera, apabila hubungan dengan darah ibu diperhatikan.

Selepas penembusan patogen ke dalam organisma yang sihat, sintesis antibodi bermula, yang merupakan perlindungan daripada jangkitan dan kepunyaan struktur imun. Mereka didapati dalam kajian awal seseorang yang menggunakan ELISA.

Tindak balas rantai polimer dilakukan untuk mengesahkan diagnosis pesakit. Ia adalah analisis bahan genetik agen patogen dan penentuan beban virus.

Diagnosis makmal hepatitis C

Diagnosis makmal bermula dengan enzim immunoassay. Tugas utamanya adalah untuk mengesan antibodi yang dihasilkan terhadap patogen. Keberkesanannya adalah hampir 95%. Terima kasih kepada penyelidikan ini, adalah mungkin untuk mengenal pasti pembawa virus di peringkat praplinikal dan hantar untuk pemeriksaan lanjut.

Analisis kualitatif ELISA menunjukkan kehadiran atau ketiadaan imunoglobulin dalam darah pesakit. Hasilnya mungkin "positif" atau "negatif." Setelah menerima jawapan pertama, orang itu dihantar untuk pemeriksaan seterusnya - PCR. Harganya bergantung kepada kualiti reagen dan makmal. Kos tindak balas rantai polimerase dapat mencapai 4 ribu rubel.

Ciri PCR

Menggunakan tindak balas rantai polimerase, walaupun sedikit bahan biologi membolehkan kita untuk menganggarkan beban virus dalam darah, iaitu, untuk mengira kepekatan patogen dalam satu mililiter cecair.

Dengan kemunculan PCR, diagnosis hepatitis telah menjadi lebih mudah. Analisis ini memungkinkan untuk mengenal pasti RNA HCV, untuk menubuhkan tahap proses menular dan penyebaran virus pembawa.

Terdapat beberapa jenis diagnosis genetik:

  1. Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C - mengesahkan kehadiran atau ketiadaan HCV dalam darah subjek:
  2. kuantitatif, yang mana anda boleh mengira kepekatan virus dan menubuhkan tahap penyakit. Hasilnya diberikan dalam IU / ml atau salinan / ml (bergantung kepada makmal);
  3. genotip - diperlukan untuk menentukan genotip HCV. Ini diperlukan untuk pilihan ubat yang paling berkesan dalam kes ini. Analisis secara tidak langsung menunjukkan keparahan proses patologi di hati. Oleh itu, dengan genotip ketiga patogen, steatosis paling sering diperhatikan, asasnya adalah pengumpulan lemak dalam hepatosit (sel-selnya). Di samping itu, jenis virus menjejaskan hasil dan tempoh kursus terapeutik.

Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

Pertama sekali, bahan biologi diperiksa di makmal untuk kehadiran RNA HCV. Adalah penting untuk diingat bahawa analisis kualitatif terhadap hepatitis C mempunyai tahap kepekaan tertentu, dan oleh itu mungkin tidak selalu memberi jawaban yang tepat. Dalam kes ini, disyorkan untuk menjalankan semula diagnostik makmal dengan menggunakan reagen lain.

Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, sistem ujian dengan kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml harus digunakan.

Hasil diagnostik boleh sama ada "positif" atau "negatif". Jika patogen tidak terdapat dalam darah, kajian itu selesai. Jika agen patogenik dikesan dalam sampel, maka beban virus dikuantifikasi.

Satu tindak balas negatif palsu diperolehi apabila proses teknologi dilanggar, sebagai contoh, komponen aktif yang menekan pembinaan salinan patogen yang memasuki medium. Oleh itu, tidak mungkin untuk memaparkan gambar darah yang benar, sebab itu jangkitan seseorang tidak didiagnosis.

Hasil positif palsu boleh diperolehi jika tiub untuk pengumpulan bahan biologi, serta persekitaran untuk kajian tersebut tercemar. Di samping itu, respons analisa seperti itu boleh dilakukan dengan jangkitan campuran, apabila hati terjejas oleh beberapa virus, contohnya, hepatitis C dan D.

Petunjuk untuk penyelidikan kualitatif

Doktor boleh menetapkan pesakit kajian kualitatif mengenai pengenalpastian RNA virus hepatitis C:

  • setelah menerima tindak balas immunoassay enzim positif atau meragukan;
  • untuk pengesahan diagnosis;
  • menentukan viral load;
  • menetapkan peringkat penyakit;
  • diagnosis jangkitan bercampur. Hepatitis C sering menjangkiti hati secara bersamaan dengan virus "D";
  • penentuan taktik terapeutik dengan mempertimbangkan genotip agen penyebab;
  • menilai dinamika perubahan semasa rawatan dengan ubat-ubatan antiviral.

Kelebihan reaksi polimerase termasuk:

  1. sensitiviti tinggi teknik, yang membolehkan untuk menubuhkan fakta jangkitan pada peringkat praslinik;
  2. pengenalpastian bahan genetik patogen, dan bukan antibodi;
  3. kemungkinan menubuhkan subjenis daripada agen patogenik;
  4. kelajuan diagnostik yang tinggi, kerana ia tidak memerlukan pembenihan bahan pada medium nutrien, dan cukup untuk menggunakan sistem ujian tertentu. Seseorang menerima keputusan selepas 5 jam;
  5. serba boleh. Analisis ini membolehkan untuk mengenal pasti sebarang bahan genetik (RNA, DNA). Oleh kerana itu, doktor dapat mengesahkan hepatitis C dan jenis penyakit lain (B);
  6. keupayaan untuk mengesan jangkitan laten.

Penyelidikan kuantitatif

Dalam kajian darah menggunakan tindak balas rantai polimerase dapat menghitung jumlah patogen dalam jumlah tetap bahan biologi. Penunjuk ditunjukkan dalam IU / ml. Melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan tahap penularan pesakit, menentukan tahap proses menular, dan juga menilai keberkesanan terapi dadah.

Atas dasar PCR, pakar memutuskan bahawa dos ubat dapat menghalang pembiakan patogen. Di samping itu, tempoh rawatan dan prognosis antiviral untuk jangka hayat ditentukan. Adalah penting untuk diingat bahawa sistem ujian mempunyai kepekaan yang tinggi, jadi kaedah ini memungkinkan untuk mengesahkan jangkitan seseorang di peringkat praslinik.

Genotyping

Memandangkan keupayaan patogen untuk bermutasi, genotipnya diperlukan untuk menentukan taktik rawatan dan pilihan ubat antiviral. Sebagai contoh, rawatan hepatitis B HCV 1 berlangsung selama 48 minggu, dengan trend positif diperhatikan hanya dalam 60% kes. Genotip 2 dan 3 mempunyai prognosis yang lebih baik. Ubat antiviral ditetapkan selama 8 bulan, dan keberkesanannya mencapai 85%.

Menurut statistik, dalam kebanyakan kes, HCV 1, 2 dan 3 didaftarkan di Persekutuan Rusia.

Apabila menguraikan ujian makmal, jawapan ini boleh ditunjukkan - "tidak ditaip". Ini bermaksud bahawa virus beredar dalam sistem peredaran pesakit dan tidak boleh diiktiraf oleh sistem ujian. Hasil analisis dalam hal ini menunjukkan bahwa patogen tidak tipikal untuk kawasan geografis tertentu.

Bagaimana untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai?

Untuk kajian kualitatif PCR untuk mengesan RNA agen penyebab hepatitis C menunjukkan keputusan yang betul, adalah perlu untuk mematuhi keperluan untuk menyediakan diagnostik makmal:

  1. pensampelan darah dijalankan pada perut kosong, dan jurang "lapar" tidak sepatutnya lebih pendek daripada 8 jam;
  2. dua hari sebelum kajian, disyorkan untuk berhenti meminum minuman beralkohol dan meninggalkan masakan pedas, berlemak dan asap;
  3. membatalkan pengenalan dadah yang mengurangkan pembekuan darah, misalnya, heparin. Sekiranya ubat-ubatan ini ditetapkan untuk tujuan kesihatan, anda mesti memberitahu doktor. Di samping itu, pakar perlu menyedari pengambilan ubat lain yang boleh menjejaskan hasil penyelidikan makmal;
  4. Pada malam pengumpulan bahan biologi, prosedur physiotherapeutic tidak boleh dijalankan dan tidak boleh dikenakan tenaga fizikal yang teruk.

Hasil analisis dapat dipengaruhi bukan hanya oleh orang yang menyumbangkan darah, tetapi juga oleh faktor-faktor lain, yaitu:

  • pensampelan darah berkualiti rendah;
  • tidak mematuhi saranan pengangkutan bahan biologi;
  • latihan pekerja makmal yang tidak mencukupi;
  • tidak mematuhi teknik penyelidikan;
  • pengenalan antikoagulan (heparin) pada malam pensampelan darah. Kumpulan ubat ini mengurangkan pembekuan, sekali gus memperlahankan kerja reagen.

Di makmal yang berlainan, tindak balas diagnostik mungkin berbeza sedikit, tetapi kesilapan ini tidak menjejaskan hasil akhir kajian.

Perhatian khusus diberikan kepada jenis sistem ujian yang digunakan di makmal. Selalunya keutamaan diberikan kepada reagen dengan sensitiviti yang tinggi. Ini adalah penting untuk pesakit yang mempunyai viral load yang rendah, kerana ia sukar untuk dikesan.

Berapa kerapkah ujian makmal dilakukan?

Reaksi rantai polimer primer dilakukan pada orang yang telah dikesan oleh antibodi immunoassay kepada patogen hepatitis. Dalam kes ini, ia ditugaskan untuk mengesahkan fakta jangkitan seseorang dan menubuhkan tahap penyakit. Di samping itu, analisis ini membolehkan untuk menentukan subtipe virus, yang sangat penting untuk pilihan ubat-ubatan.

Tempoh berikutnya untuk ujian makmal wajib adalah 3 bulan dari permulaan terapi antiviral. Diagnostik memungkinkan untuk menilai keberkesanan ubat-ubatan, laraskan dos atau menggantikannya.

Sebagai tambahan kepada ujian asas, PCR boleh dilakukan pada 4 dan 24 minggu dari permulaan rawatan. Prognosis positif penyakit ini disahkan oleh penurunan dalam viral load selepas tiga bulan terapi. Sebagai contoh, ia harus berkurang dari 1 juta IU / ml kepada beberapa ratus ribu.

Sekiranya kepekatan agen patogenik dalam darah kekal pada tahap yang sama atau bertambah sedikit, ini menunjukkan keberkesanan ubat-ubatan antiviral dan memerlukan penggantiannya. Menggunakan PCR pada akhir rawatan, adalah mungkin untuk mengesahkan pemulihan pesakit.

Untuk menerangkan dengan betul hasil diagnostik makmal, perundingan pakar hepatologi atau pakar penyakit berjangkit diperlukan. Memandangkan frekuensi tinggi tindak balas palsu dalam ELISA, analisis ini digunakan secara eksklusif untuk pemeriksaan awal. Untuk pemeriksaan yang lebih menyeluruh pesakit yang menggunakan reaksi rantai polimerase.

Adakah anda berfikir bahawa mustahil untuk mengubati hepatitis C?

Hari ini, ubat-ubatan moden dari generasi baru Sofosbuvir dan Daclatasvir mungkin menyembuhkan hepatitis C untuk 97-100%. Anda boleh mendapatkan ubat-ubat terbaru di Rusia dari wakil rasmi gergasi farmaseutikal India, Zydus Heptiza. Ubat yang diperintahkan akan dihantar melalui kurier dalam tempoh 4 hari, pembayaran selepas penerimaan. Dapatkan konsultasi percuma mengenai penggunaan ubat-ubatan moden, serta belajar tentang cara memperoleh, anda boleh di laman web rasmi pembekal Zydus di Rusia.

Analisis kualitatif terhadap hepatitis C

"Mengenal pasti gen virus hepatitis C (HVC) dalam darah pesakit adalah tahap kedua diagnosis makmal patologi berjangkit ini. Untuk mengesan patogen yang tidak mempunyai membran sel dan, dengan itu, antigen permukaan, kaedah reaksi rantai polimerase digunakan. Dengan menggunakan kaedah ini, molekul secara langsung ditentukan, di mana semua maklumat genetiknya dikodkan - RNA.

RNA - Asid ribonukleat, bersama dengan DNA, adalah sebahagian daripada sel-sel semua organisma hidup. Virus hepatitis C mengandungi molekul RNA dan mempunyai keupayaan untuk memutuskannya.

Ujian genom HVC biasanya ditetapkan selepas ujian darah biokimia dilakukan dan tindak balas positif terhadap antibodi (anti-HVC) diperolehi.

Apa maksudnya?

Kajian antibodi terhadap HVC adalah pemeriksaan, iaitu, ia boleh digunakan untuk memeriksa populasi besar (doktor, wanita hamil, pesakit hospital, penderma, pengguna dadah suntikan, dijangkiti HIV). Hasil negatif daripada analisis makmal anti-HVC menunjukkan bahawa tiada tindak balas imun terhadap virus itu dikesan dalam darah pesakit. Hasil negatif boleh diperolehi dalam kes seperti berikut:

Sekiranya seseorang tidak pernah dijangkiti hepatitis C.

Sekiranya sensitiviti sistem ujian makmal adalah lebih rendah daripada kepekatan anti-HVC.

Sekiranya jangkitan berlaku kurang dari 2 bulan yang lalu dan anti-HVC dalam darah tidak cukup untuk ditentukan. Apabila tindak balas negatif palsu disebabkan oleh faktor manusia.

Sekiranya hasilnya adalah antibodi kepada HVC yang dijumpai di pesakit, ini bermakna virus hepatitis C berada di dalam tubuh pesakit pada masa kajian atau berada dalam darah beberapa lama dahulu. Dengan hasil positif terhadap anti-HVC, terdapat keperluan untuk kajian makmal tambahan yang akan mengesan bahan genetik patogen itu sendiri, menentukan kepekatan gennya (viral load, viremia) dan menubuhkan genotip.

Analisis RNA Virus Hepatitis C

Genom HVC di bawah keadaan makmal boleh dikesan menggunakan beberapa kajian:

DNA bercabang (p-DNA);

penguatan transkripsi (TMA);

reaksi rantai polimerase (PCR).

Kaedah p-DNA adalah cara yang murah dan mudah untuk mengesan genom virus dalam sebilangan besar orang yang diperiksa. Kelemahan utamanya adalah kepekaan yang rendah: ia mendedahkan HVC hanya apabila kepekatannya melebihi 500 IU / ml.

Kaedah penguatan transkrip mengesan asid nukleat virus dalam serum. Analisis ini mempunyai sensitiviti tinggi (5-10 IU / ml), tetapi ia belum lagi cukup dimasukkan ke dalam amalan makmal di mana-mana.

Kaedah PCR di Rusia adalah peperiksaan makmal yang paling biasa dan boleh diakses dengan sensitiviti tinggi (dari 50-60 IU / ml).

Kajian PCR dilakukan di mana-mana makmal klinikal yang mempunyai akreditasi yang sesuai. Satu kaedah diagnostik yang sangat penting, yang mempengaruhi keputusan analisis, adalah kepekaan sistem ujian yang digunakan di makmal. Sebagai contoh, sensitiviti diagnostik sebanyak 60 IU / ml, seperti dalam Invitro Laboratories, membenarkan pengesanan RNA virus 3 bulan selepas jangkitan. Pada sensitiviti rendah sistem ujian, gen patogen tidak dapat dikesan walaupun 4 bulan selepas jangkitan.

RNA virus Hepatitis C: Kaedah PCR

Kaedah PCR mempunyai banyak kelebihan berbanding ujian makmal lain untuk mengesan gen HVC:

kepekaan yang tinggi. Kaedah ini membolehkan untuk menentukan bahan genetik patogen walaupun dengan kepekatan minimum dalam sampel;

kekhususan yang hebat. Mengenal pasti gen virus genotip tertentu di antara pelbagai DNA dan RNA patogen lain, yang membolehkan genotip patogen;

kelajuan pegangan. Ketiadaan proses penanaman patogen yang panjang memendekkan masa untuk mendapatkan hasil sehingga beberapa jam; universiti analisis.

Prosedur penyelidikan universal membolehkan penggunaan serentak satu sampel darah manusia untuk mengesan bahan genetik patogen yang berbeza. Kelebihan ini memungkinkan untuk mempertimbangkan PCR sebagai "standard emas" untuk diagnosis makmal hepatitis C virus bersama dengan immunoassay enzim untuk anti-HVC.

PCR adalah kajian yang digunakan untuk menentukan gen HVC dalam darah individu. Kajian ini terdiri daripada beberapa peringkat:

Pensampelan biomaterial.

Berulang kali meningkatkan kepekatan salinan RNA dalam sampel yang dipilih.

Pengesanan bahan genetik menggunakan sistem ujian khas.

Selepas mengambil darah vena dari pesakit, secara artifisial memulakan proses pelbagai replikasi (penguatan, penyalinan) gen HVC dilakukan.

Untuk melakukan ini, dengan cara tertentu, ubah suhu di dalam tiub dengan biomaterial beberapa kali. Apabila bilangan salinan RNA dalam tiub ujian mencapai nilai yang dikehendaki, lakukan pengesanan patogen menggunakan diagnostik ujian khas.

kualitatif (mengesan kehadiran virus),

kuantitatif (menentukan kepekatan gen virus per unit volume)

genotip (menetapkan genotip patogen).

RNA hepatitis C: Analisis kualitatif

Tugas PCR yang berkualiti adalah untuk menentukan kehadiran HVC dalam biomaterial yang dibentangkan. Kajian ini biasanya dijalankan untuk pemeriksaan diagnosis penyakit atau pengesanan pengangkutan. Berikannya selepas anti-HVC dikesan oleh ELISA.

Untuk mendiagnosis hepatitis C, adalah mencukupi untuk mengesan bahan genetik HCV secara kualitatif, iaitu, tanpa mengira kepekatannya dalam jumlah darah. Hasil PCR berkualiti tinggi boleh: "RNA dikesan" atau "RNA tidak dikesan."

Ketepatan kaedah itu bersamaan dengan 95%. Pada masa yang sama, ketepatan diagnostik ujian sendiri mencapai 100%, dan 5% adalah faktor manusia, yang selalu ada dalam kajian makmal. Untuk mengelakkan analisa negatif palsu, terutama pada orang yang mempunyai viremia rendah, kepekaan tinggi terhadap sistem diagnostik yang digunakan dalam kajian ini adalah perlu. Kepekaan sistem ujian tidak boleh kurang daripada 60 IU / ml.

RNA hepatitis C: Analisis Kuantitatif

Analisis kuantitatif ditetapkan apabila anda perlu mengetahui tahap viremia dalam tubuh manusia. Petunjuk untuk menjalankan kajian ini adalah:

hasil positif PCR berkualiti tinggi, dengan syarat pengesanan antibodi kepada virus;

menubuhkan tahap patologi;

penentuan beban virus dalam hepatitis;

pilihan gabungan ubat-ubatan antiviral;

memantau tindak balas virologi terhadap terapi antiviral;

penilaian kebarangkalian peralihan dari hepatitis C akut ke kronik.

Hasil analisis dinyatakan dalam IU / ml (unit internasional dalam 1 ml serum) atau dalam salinan / ml (jumlah salinan gen virus dalam 1 ml serum). PCR kuantitatif tidak normal: biasanya, gen HVC dalam darah manusia tidak boleh dikesan. Hasil kajian dibandingkan dengan nilai rujukan yang ditetapkan untuk tahap viral load yang berbeza.

Oleh itu, penunjuk (dalam IU / ml):

di bawah 4 × 10 * 5 dianggap sebagai viremia rendah;

dari 4 × 10 * 5 hingga 8 × 10 * 5 - purata;

lebih dari 8 × 10 * 5 - tinggi.

Lebih banyak salinan RNA virus dalam darah, lebih agresif penyakit dan lebih besar risiko penghantaran virus kepada orang lain. Tetapi paras viral load bukanlah satu-satunya penunjuk yang mempengaruhi keparahan patologi dan prognosis lanjut untuk pesakit: genotip patogen juga penting.

Mengadakan genotip adalah perlu untuk menetapkan rejimen rawatan yang betul. Ia juga menentukan prognosis untuk kesihatan dan kehidupan pesakit. Sebagai contoh, virus 3 genotip sering membawa kepada fibrosis atau sirosis hati, berbanding dengan pesakit yang membawa 1 genotip.

Hepatitis C: analisis dan transkrip

RNA Diagnosis hepatitis C tidak boleh dibuat hanya dengan hasil analisis kualitatif dan / atau kuantitatif PCR sahaja: penentuan HVC dan tahap beban virus tidak mencukupi untuk menetapkan terapi antiviral yang mencukupi. Seorang pesakit yang berpotensi harus diperiksa secara komprehensif (klinikal, makmal, instrumen) untuk mempunyai gambaran objektif patologi. Betul menetapkan satu set peperiksaan untuk menentukan diagnosis hepatitis C, dan hanya doktor sahaja yang dapat menguraikan hasilnya dengan betul.


Artikel Yang Berkaitan Hepatitis