Ujian darah HCV: apakah itu?

Share Tweet Pin it

Mengikut konsep perubatan moden, kelebihan kelaziman di dunia adalah kepunyaan virus. Kemanusiaan terpaksa menggunakan banyak daya dan sumber untuk memerangi mereka. Peranan yang amat penting adalah diagnosis lesi virus hati, khususnya hepatitis C. Penyentuhan parameter makmal yang betul untuk mengesan penyakit ini adalah sukar kerana sejumlah besar keputusan ujian darah positif palsu. Oleh itu, sangat penting pilihan dan tafsiran yang betul mengenai kajian ini.

Kaedah pengesanan virus

Virus hepatitis C (hcv) adalah helai kecil RNA dalam sampul virus, yang menggunakan bahan genetik sel hati untuk pembiakannya. Hubungan langsung membawa kepada:

  • Permulaan proses keradangan di hati;
  • Pemusnahan sel hati (sitolisis);
  • Pelancaran mekanisme imun dengan sintesis antibodi spesifik;
  • Pencegahan autoimun kompleks imun terhadap hepatosit yang meradang.

Virus hepatitis C, yang memasuki badan, menyebabkan tindak balas imun yang sangat perlahan, yang menyebabkan ia tidak disedari untuk masa yang lama. Penyakit ini sering dikesan hanya pada peringkat sirosis hati, walaupun semua zarah virus masa dan antibodi yang berkaitan dengannya beredar dalam darah. Semua kaedah yang diketahui untuk mendiagnosis jangkitan hcv adalah berdasarkan ini. Ini termasuk:

  1. Ujian serologi di makmal;
  2. Diagnostik PCR (reaksi rantaian polimerase);
  3. Ujian cepat untuk menentukan penyakit di rumah.

Video mengenai hepatitis C:

Petunjuk yang mungkin untuk penyelidikan

Sesiapa sahaja boleh menguji jangkitan hcv. Petunjuk khusus untuk ini tidak perlu, kecuali keinginan seseorang menjalani ujian darah ini. Tetapi terdapat kategori orang yang tertakluk kepada penyelidikan mandatori. Ini termasuk:

  • Penderma darah;
  • Orang yang menerima pemindahan darah, komponen atau ubat berdasarkannya;
  • Tahap transaminase hepatik (AlAT, Asat), terutamanya selepas campur tangan pembedahan sebelumnya, melahirkan anak dan prosedur perubatan lain;
  • Hepatitis C virus yang disyaki atau keperluan untuk mengecualikan diagnosis ini;
  • Ujian negatif untuk hepatitis B virus di hadapan gejala keradangan hati;
  • Memantau keberkesanan terapi untuk jangkitan hcv dan membuat keputusan mengenai taktik rawatan selanjutnya.

Ciri-ciri diagnosis serologi dan penilaian keputusan

Ujian darah makmal bagi hcv melibatkan pengesanan antibodi (imunoglobulin) kelas M dan G kepada komponen antigen daripada virus hepatitis C. Untuk tujuan ini, ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) dan radioimmunoassay (RIA) digunakan. Kaedah makmal untuk mengesan antibodi dianggap paling dipercayai kerana mereka membenarkan penggunaan beberapa kompleks antigen jenis virus hepatitis C yang paling biasa sebagai reagen.

Untuk kajian ini, kira-kira 20 mililiter darah vena dikumpulkan dari vena periferal. Ia disentri dan dipertahankan untuk mendapatkan plasma (bahagian telus cecair). Unsur dan sedimen yang dibentuk dikeluarkan. Untuk mengelakkan positif palsu, lebih baik mengambil darah pada waktu pagi sebelum makan. Beberapa hari sebelum ini, adalah dinasihatkan untuk tidak mengecualikan ubat-ubatan, terutamanya yang mempengaruhi keadaan sistem imun.

Keputusan ujian boleh dibentangkan seperti berikut:

  1. HCV adalah negatif. Ini bermakna tiada antibodi terhadap virus hepatitis C yang dikesan di dalam badan. Tiada penyakit;
  2. HCv adalah positif. Ini menunjukkan kehadiran antibodi kepada virus hepatitis C dalam sampel darah yang dikaji. Orang itu sama ada mempunyai penyakit ini atau sedang mengalami bentuk akut atau kronik;
  3. IgG Anti-hcv dikesan. Dalam kes ini, ia patut memikirkan hepatitis C virus kronik;
  4. IgM anti-hcv dikesan. Kehadirannya yang terpencil menandakan proses akut, dan gabungannya dengan IgG anti-hcv menunjukkan suatu eksaserbasi kronik.

Ciri ujian pantas

Sesiapa sahaja boleh melakukan ujian darah untuk hcv sendiri. Ini menjadi mungkin kerana penciptaan sistem ujian khas untuk diagnosis cepat hepatitis C. Virus prestasi mereka adalah lebih rendah daripada kaedah serologi makmal, tetapi sangat baik untuk penentuan anggaran kemungkinan jangkitan dalam masa yang singkat.

Anda boleh membeli atau memesan sistem ujian di mana-mana farmasi. Ia termasuk semua yang anda perlukan untuk ujian. Analisis bermula dengan pembukaan bekas steril dan penyediaan semua komponen. Selepas rawatan dengan serbet khas dengan jari antiseptik, ia perlahan-lahan ditusuk dengan scarifier. Menggunakan pipet, 1-2 titis darah dikumpulkan dan dipindahkan ke rehat pada plat ujian. Kepada darah menambah 1-2 titik reagen dari botol, yang merupakan sebahagian daripada ujian. Hasilnya hendaklah dinilai selepas 10 minit. Sangat penting untuk tidak menilai hasilnya selepas 20 minit kerana kemungkinan hasil positif palsu.

Ujian darah boleh ditafsirkan sebagai:

  1. Di dalam tetingkap tablet muncul satu jalur ungu (ujian negatif). Ini bermakna tiada antibodi untuk hcv ditemui dalam darah yang dikaji. Lelaki sihat;
  2. Di dalam tetingkap tablet muncul dua jalur ungu (ujian positif). Ini menunjukkan kehadiran antibodi dalam darah ujian dan persatuan badan dengan hepatitis C. Virus orang tersebut tertakluk kepada kaedah diagnosis serologi yang lebih menyeluruh tanpa gagal;
  3. Tidak satu jalur muncul di tetingkap tablet. Sistem ujian rosak. Pengambilan semula adalah disyorkan.

Ciri-ciri diagnostik PCR

Reaksi rantai polimerase adalah cara yang paling moden untuk mengesan bahan genetik mana-mana sel. Berkaitan dengan hepatitis C virus, kaedah ini membolehkan untuk mengesan molekul RNA zarah virus. Ini boleh dilakukan melalui kaedah kualitatif dan kuantitatif. Kaedah pertama mungkin tidak diketahui jika jumlah zarah virus dalam darah ujian tidak mencapai nilai ambang. Kaedah kedua membolehkan anda menentukan dengan tepat bilangan rantaian virus RNA yang dikesan dan lebih sensitif.

Analisis boleh diwakili oleh keputusan berikut:

  1. RNA HCV tidak dikesan. Ini bermakna tiada zarah virus dalam darah yang diuji;
  2. RNA hcv dikesan. Ini menunjukkan jangkitan hepatitis C;
  3. PCR ujian hivik kuantitatif dijalankan untuk menilai tahap jangkitan darah pesakit dan aktiviti virus dalam badan. Kadar viral darah tinggi adalah 600 hingga 700 IU / ml. Petunjuk di atas angka ini dipanggil sangat tinggi, di bawahnya - rendahnya viral load of blood.

Ujian darah untuk hcv dalam diagnosis hepatitis C virus adalah satu-satunya kaedah yang bermaklumat, boleh diakses dan tidak berbahaya untuk mengesahkan diagnosis. Tafsiran yang betul dan gabungan pelbagai cara pelaksanaannya meminimumkan bilangan kesilapan diagnostik.

Anti-HCV terbaik (set 2) 12x8

Kucing. No 0772

Harga: atas permintaan

Anda boleh menambah item tersebut ke kereta dengan menentukan kuantiti

Jenis pembungkusan: kotak kadbod

Kit immunoassay enzim untuk pengesanan imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C dalam serum / plasma manusia dan produk darah (imunoglobulin, interferons, cryoprecipitate, albumin). Set 2 direka untuk 96 penentuan, termasuk kawalan - 4 lubang untuk setiap analisis, serta penggunaan pecahan satu jalur per kajian. Direka untuk tetapan manual, dalam penganalisis jenis terbuka ELISA. Teknik ini berdasarkan kepada fasa pepejal ELISA menggunakan antigen rekombinan. Kemungkinan pengiraan pekali positif. Kesamaan volumetrik kawalan dan sampel. Penyeragaman syarat-syarat tindak balas enzimatik dengan kromogen dalam termostat pada 37 ° C. Masa reaksi: 1 jam 20 minit

Tujuan fungsian

Disyorkan untuk pemeriksaan penderma darah, organ, tisu manusia, diagnosis pembezaan hepatitis virus

Spesifikasi teknikal

Kit termasuk:
1. Lipat tablet - 1 pc.
2. Kawalan positif dan negatif - 2x1 fl.
3. Conjugate dan penyelesaian untuk pencairannya (RK) - 2x1 fl.
4. Penyelesaian untuk pencairan serum (RS) - 1 fl.
5. Larutan buffer fosfat-saline, tumpuan (FSB) - 2 fl.
6. Larutan penyangga substrat (SBR) - 1 fl.
7. Tetramethylbenzidine concentrate (TMB) - 1 fl.
8. Hentikan reagen - 1 fl.
9. Arahan untuk digunakan.
10. Filem untuk melekat.
Sampel yang dipelajari: serum atau plasma darah, dengan jumlah tidak melebihi 40 μl.
Bilangan protokol untuk ELISA: sekurang-kurangnya 4.
Syarat penyimpanan: pada suhu +2. 8 ° C untuk keseluruhan hayat simpanan yang ditunjukkan pada label.
Hayat rak set adalah 12 bulan dari tarikh pengeluaran.
Berdaftar di Roszdravnadzor

Ujian darah HCV

Cara penyebaran penyakit boleh dibahagikan kepada kumpulan:

  • Parenteral - bermakna bahawa jangkitan berlaku melalui perkongsian instrumen perubatan, jarum dan peranti manicure yang tidak steril;
  • Seksual - virus itu dihantar dari satu pasangan ke pasangan lain semasa hubungan seks tanpa perlindungan;
  • Jalan menegak adalah jangkitan janin dari ibu yang sakit.

Hepatitis harus diuji oleh orang yang:

  • Bersedia untuk dirawat hospitalisasi;
  • Rancang untuk mempunyai bayi;
  • Peningkatan bilirubin, ALT atau AST ditemui dalam analisis klinikal;
  • Mempunyai gambaran gejala mirip dengan tanda-tanda hepatitis C;
  • Selalunya menukar pasangan seksual atau lebih suka seks tanpa perlindungan;
  • Ketagih dengan dadah;
  • Berkumpul menjadi penderma;
  • Mereka yang bekerja di institusi perubatan atau prasekolah harus menjalani pemeriksaan sepenuhnya setiap tahun, termasuk jenis analisis ini.

Ujian darah HCV adalah kaedah makmal untuk diagnosis hepatitis C, mekanisme tindakannya didasarkan pada pengenalpastian antibodi seperti Ig G dan Ig M, yang mula aktif berkembang ketika antibodi virus muncul dalam darah. Apa itu? Ini adalah mikroorganisma patogen yang muncul beberapa minggu atau bahkan bulan selepas jangkitan seseorang.

Analisis penyahkodan

Mengetahui struktur HCV, saintis menyimpulkan bahawa patogen ini adalah genom yang dimiliki oleh virus haiwan dan tumbuhan. Ia terdiri daripada satu gen, yang sesuai maklumat mengenai sembilan protein. Bekas yang diamanahkan dengan tugas menembusi virus ke dalam sel, yang terakhir bertanggungjawab untuk pembentukan zarah virus, dan yang lain pula menukar fungsi semula jadi sel itu kepada diri mereka sendiri. Mereka tergolong dalam kumpulan protein protein apabila enam yang lain tidak berstruktur.

Genom HCV adalah satu helai RNA yang dilampirkan dalam kapsul sendiri (capsid) yang dibentuk oleh protein nukleokapsid. Semua ini dikelilingi oleh cangkerang yang terdiri daripada protein dan lipid, ia membolehkan virus berjaya mengikat sel sel yang sihat.

Sebaik sahaja virus memasuki aliran darah, ia mula mengedarkan seluruh tubuh melalui aliran darah. Sekali dalam hati, genom mengaktifkan fungsinya dan bergabung dengan sel-sel hati, secara beransur-ansur menembusi mereka. Hepatosit (begitu dikenali sebagai sel-sel ini) mengalami gangguan semasa berfungsi. Tugas utama mereka adalah untuk bekerja untuk virus ini, di mana mereka perlu mensintesis protein virus dan asid ribonukleik.

HCV membezakan beberapa genotip, iaitu, strain. Pada masa ini, 6 genotipe diketahui, dan setiap spesies ini mempunyai subspesiesnya sendiri. Kesemua mereka ditetapkan bergantung kepada penomboran dari 1 hingga 6. Terdapat maklumat mengenai penyetempatan virus di dunia. Sebagai contoh, 1, 2, dan 3 genotip didapati di seluruh dunia, manakala 4 adalah lebih biasa di Timur Tengah dan Afrika, 5 di Afrika Selatan, dan 6 di Asia Tenggara.

Asas rawatan perlu ujian darah positif untuk HCV, serta genotip tertentu.

Penyahkodan analisis HCV:

  • Anti-HCV Ig M - penanda replikasi aktif virus hepatitis C;
  • Anti-HCV Ig G - kemungkinan kehadiran virus hepatitis C;
  • Ag HCV adalah hasil positif yang menunjukkan kehadiran virus hepatitis C;
  • RNA HCV - virus hepatitis C hadir di dalam badan dan secara aktif berkembang.

Hasil positif palsu

Ia juga kurang bercakap tentang hasil negatif palsu yang direkodkan pada pesakit yang mengambil imunosupresan, atau ini dipengaruhi oleh ciri-ciri sistem imun mereka. Hasil yang sama dijangka jika hepatitis C berada di peringkat awal pembangunannya.

Sekiranya anda mempunyai sebarang salah faham, anda boleh menggunakan ujian PCR hepatitis C, jika ia memberi kesan positif, kemudian ambil ujian lain untuk menentukan genotip virus.

Kesahan dan bagaimana untuk lulus

Analisis hepatitis C membayangkan pensampelan darah pesakit pada perut kosong, memandangkan dia harus makan malam tidak lewat daripada 8 jam sebelum penghantaran bahan. Selepas bangun, anda hanya boleh minum sedikit air tanpa karbon. Lebih baik jika pada waktu malam kajian anda memantau diet anda, menjadikannya semudah yang mudah dan mudah. Makanan goreng dan berlemak harus dikecualikan sepenuhnya, serta alkohol. Buruh dan sukan fizikal yang keras boleh menjejaskan ketepatan keputusan ujian, jadi cuba mengelakkannya.

Sekiranya anda akan menderma darah untuk analisis untuk mengesan hepatitis C, maka anda harus diberitahu bahawa ubat-ubatan boleh mengganggu nilai-nilai sebenar, oleh itu, menjalankan kajian sama ada sebelum permulaan ubat, atau hanya selepas beberapa minggu selepas pembatalannya. Jika menghentikan rawatan dadah tidak mungkin mengikut keterangan doktor, maka beritahu jururawat yang mengambil ujian. Dia harus memperhatikan nama ubat yang diambil dan dos di mana anda telah ditetapkan.

Ujian makmal memerlukan serum. Berapa banyak bahan yang sah? Mereka boleh disimpan selama kurang daripada lima hari pada suhu antara 2 hingga 8 darjah Celcius, dan lebih daripada lima hari, dengan syarat suhu penyimpanan ialah -20 darjah Celsius.

Ujian darah HCV adalah wajib bagi mereka yang mengalami kekurangan imunisasi, terutama dengan HIV.

Pentadbiran portal secara mutlak tidak mengesyorkan rawatan diri dan menasihati untuk melihat seorang doktor pada gejala pertama penyakitnya. Portal kami membentangkan pakar perubatan terbaik yang boleh anda daftarkan dalam talian atau melalui telefon. Anda boleh memilih doktor yang betul atau kami akan mengambilnya untuk anda secara percuma. Juga, hanya apabila merakam melalui kami, harga konsultasi akan lebih rendah daripada di klinik itu sendiri. Inilah hadiah kecil untuk pengunjung kami. Selamatkan awak!

Anti vgs terbaik

Kit immunoassay enzim untuk mengesan imunoglobulin kelas M ke virus hepatitis C.

Anti-HCV-auto terbaik (set 1)
(Untuk penganalisis automatik)

Anti-HCV-auto terbaik (set 2 / Charoite)

Kit immunoassay enzim untuk mengesan immunoglobulins kelas G dan M untuk virus hepatitis C untuk penganalisis ELISA automatik.

Anti-HCV terbaik (Kit 1)

Anti-HCV terbaik (Kit 2)

Anti-HCV terbaik (Kit 3)

Anti-HCV terbaik (Kit 4)

Kit immunoassay enzim untuk pengesanan imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C.

Kit immunoassay enzim untuk mengesan imunoglobulin kelas G dan M kepada protein individu virus hepatitis C (teras, NS3, NS4, NS5).

Ujian pengesahan anti-HCV yang terbaik

Kit immunoassay enzim untuk kehadiran imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C.

VGS AG / AT-IFA-BEST (set 1)

VGS AG / AT-IFA-BEST (set 2)

Kit immunoassay enzim untuk mengesan antibodi kepada virus hepatitis C dan antigen teras HCV.

Kit reagen untuk pengesanan immunoenzymatic antigen teras virus hepatitis C.

Kit reagen untuk mengesahkan kehadiran antibodi kepada virus hepatitis C dengan kaedah pembakaran imun.

Tetapkan untuk kawalan kualiti makmal ELISA "Serum mengandungi antibodi kepada virus hepatitis C."

Panel Kawalan Serum Anti-HCV

Satu set sampel sera darah, yang mengandungi dan tidak mengandungi antibodi kepada hepatitis C. Untuk kawalan kualiti dalaman (penilaian kebenaran) kajian anti-HCV.

Panel Serum Standard Anti-HCV

Satu set sampel sera darah, mengandungi dan tidak mengandungi antibodi untuk hepatitis C.

Anti vgs positif apa maksudnya

Antibodi hepatitis C dan apa yang anda perlu tahu tentangnya

Apabila pelbagai zarah asing, seperti virus, masuk ke dalam tubuh seseorang, sistem imun manusia mula menghasilkan bahan-bahan tersebut, dipanggil immunoglobulin. Ini adalah sel khusus yang membantu tubuh mula melawan virus. Mereka dipanggil antibodi untuk hepatitis C. Apa yang perlu saya ketahui tentang mereka?

Apakah antibodi untuk hepatitis C?

Antibodi tersebut dikesan dengan kaedah ELISA atau pemeriksaan khas, yang digunakan untuk menentukan sama ada seseorang mempunyai virus hepatitis C. Antibodi tersebut untuk hepatitis C datang dalam 2 kelas:

- jadi antibodi ini untuk hepatitis C dipanggil dalam bahasa Latin. Pada masa yang sama, jumlah antibodi ini adalah antibodi terhadap hepatitis C.

Apakah kehadiran antibodi terhadap hepatitis C bermakna?

Benar-benar semua pesakit diuji untuk kehadiran penanda tersebut untuk mendedahkan sama ada mereka mempunyai virus hepatitis C. Sekiranya penyakit itu sudah akut atau kronik, mereka mempunyai antibodi Anti-HCV, antibodi ini untuk hepatitis C boleh dikesan hanya selepas 4 atau 6 minggu bermula.

Ada kes-kes apabila, dengan kehadiran antibodi Anti-HCV, orang pulih tanpa bantuan pakar, tetapi sendiri. Orang-orang ini boleh menemui pasaran ini dalam tempoh 4 - 8 tahun selepas pemulihan mereka. Walaupun ujian anti-HCV positif, ini masih belum cukup untuk menentukan diagnosis dengan betul. Dalam hepatitis kronik, antibodi tersebut untuk hepatitis C sentiasa dirahsiakan, dan selepas hasil positif rawatan, mereka dapat bertahan dalam tubuh untuk masa yang lama, tetapi tititer mereka secara beransur-ansur mula menurun.

Antibodi Hepatitis C dan apa yang perlu saya ketahui tentang mereka?

Paling penting, anda perlu tahu bahawa antibodi tersebut tidak dapat melindungi daripada perkembangan jangkitan itu sendiri, dan juga tidak dapat memberikan imuniti daripada jangkitan semula.

Terdapat juga perkara seperti Spektrum anti-HCV. Ini juga antibodi, lebih-lebih lagi, khusus, mereka sesuai untuk individu, kedua-dua protein struktur dan bukan struktur virus ini. Takrifan mereka adalah penting untuk menilai sejauh mana beban virus, aktiviti jangkitan, risiko kronik, serta membezakan antara hepatitis akut atau kronik dan berapa banyak hati yang telah terjejas.

Antibodi untuk hepatitis C dari kelas IgM adalah antigen dari virus ini. Mereka boleh ditentukan selepas 6, dan dalam sesetengah kes walaupun 4 minggu selepas jangkitan, dalam kes ini tumpuan mereka dapat mencapai maksimum. Dan selepas proses ini selesai, tahap IgM akan mula jatuh, tetapi apabila jangkitan diaktifkan semula, tahap akan meningkat lagi. Oleh itu, antibodi tersebut dianggap sebagai gejala langsung dari jangkitan kronik atau akut dengan tanda reaktivasi.

HCV - ujian darah - apa itu?

Salah satu penyakit yang paling kompleks dan biasa pada akhir abad yang lalu adalah jangkitan dengan virus hepatitis C. Di negara-negara maju, kelaziman penyakitnya mencapai 2%, sementara jumlah keseluruhan pesakit di seluruh dunia adalah 500 juta orang. Jangkitan ini dikesan lebih awal daripada pendahulunya: hepatitis A dan B - dan pada mulanya ia dipanggil "tidak jangkitan A atau B". Seiring dengan pertumbuhan ketagihan dadah, jumlah yang dijangkiti semakin meningkat setiap tahun. Sebab untuk semua adalah cara jangkitan: dengan ubat intravena.

Juga, virus itu ditularkan semasa melahirkan anak dari ibu ke anak jika kerosakan kulit berlaku. Oleh itu, penting untuk mengetahui, ujian darah HCV - apakah itu? Semasa mengandung, adalah perlu untuk lulus setiap ibu masa depan. Penyakit ini adalah pemimpin di antara sebab-sebab yang memerlukan pemindahan ke hati yang sakit.

Bagaimanakah hepatitis C berkembang?

Jangkitan virus hepatitis C berlaku seperti berikut: darah seseorang yang sakit mesti memasuki darah seseorang yang sihat. Aliran darah pertama membawa zarah virus, dibubarkan dalam darah yang sihat, ke dalam hati dan pembiakan bermula dengan segera. Dalam kes ini, hati manusia terpengaruh dua kali; di satu pihak, sel-sel hati rosak oleh aktiviti virus itu sendiri, di sisi lain - tubuh manusia mula bertarung: ia menghantar reaksi imun, iaitu sel-sel limfosit khusus yang akan dipanggil untuk memusnahkan sel-sel hati yang dijangkiti.

Virus ini mengiktiraf sistem kekebalan tubuh mengikut kandungan bahan genetik asing. Sesiapa yang menemui ini, serta beberapa pesakit yang wajib, tahu apa yang bermakna ujian darah HCV. Semua orang, sekurang-kurangnya sekali berhadapan dengan masalah ini, akan mengatakan bahawa ini adalah petunjuk yang sangat penting pada tahap pengesanan dan pada tahap rawatan.

Bilakah diuji HCV?

Apabila pesakit mempunyai aduan hati, doktor biasanya menetapkan ujian darah HBS dan HCV untuk pesakit sedemikian. Untuk menentukan sama ada penyakit itu disebabkan oleh kehadiran virus hepatitis C atau penyakit lain yang berkaitan dengan darah, ia adalah ujian darah HCV yang diperlukan. Apakah penunjuk ini?

Analisis mendedahkan antibodi dalam darah manusia yang mungkin tergolong dalam salah satu daripada 2 kelas:

  • Antibodi kepada HCV. Mereka adalah penanda utama. Kehadiran jangkitan di dalam badan disahkan dengan pengesanan RNA HCV. Antibodi ini terdapat di peringkat pemulihan dan mungkin juga terus berada dalam darah selama 1-4 tahun. Penunjuk utama kehadiran hepatitis kronik adalah kadar peningkatan anti-HCV.
  • Tahap IgA, IgM, IgG dalam serum. Pertumbuhan penanda ini menunjukkan kerosakan hati apabila terdedah kepada alkohol, dengan sirosis biliard dan beberapa penyakit lain.

Apakah penanda bercakap tentang?

Dari saat antigen memasuki tubuh manusia pada 4-5 minggu, ia dapat dikesan oleh ujian darah HCV. Bahawa ia adalah virus hepatitis C yang tidak dapat dikatakan dengan tepat. Data-data ini diperlukan bagi doktor untuk membuat keputusan mengenai keperluan untuk terapi antiviral pesakit sedemikian. Terutama jika kurang daripada 750 salinan RNA setiap 1 ml darah dikesan dalam darah, ini menunjukkan serangan virus yang minimum.

Antibodi hepatitis C sentiasa tergolong dalam salah satu daripada dua kelas, G atau M, yang diperlukan untuk menambah ujian darah kepada HCV. Decryption menerangkan parameter ini sebagai kelas immunoglobulin G (IgG) dan M (IgM). Hasil positif pada penanda pertama tidak menunjukkan diagnosis pasti. Imunoglobulin Kelas G mencapai prestasi maksimumnya pada 5-6 bulan dari saat jangkitan di dalam badan dan tetap sama dalam hepatitis kronik.

Imunoglobulin kelas M boleh ditentukan sudah 1-1,5 bulan selepas jangkitan dan sangat cepat mencapai kepekatan maksimum. Terdapat satu lagi penunjuk - anti-NS3, yang, dengan prestasi tinggi, adalah pendahulu yang jelas kehadiran proses akut di dalam badan.

Bagaimana cara menderma darah untuk analisis HCV?

Untuk menderma darah di makmal untuk menentukan kehadiran antibodi HCV, tidak ada arahan khusus. Satu-satunya cadangan doktor: pagar perlu dibuat pada perut kosong. Darah diambil dari urat pesakit yang diuji menggunakan picagari pakai buang.

Tafsiran petunjuk

Oleh itu, pesakit yang dikatakan melakukan ujian darah HCV. Apakah ini plus dan minus? Jadual berikut akan menjawabnya.

Jenis ujian HCV

Terdapat ujian kualitatif dan kuantitatif yang menentukan HCV (ujian darah). Apa itu?

Ujian kuantitatif digunakan jika had bawah mencapai 500 RNA salinan per ml atau 200 unit per ml. Ujian ini menentukan HCV-RNA. Pengukuran dilakukan dua kali, kerana data sering berbeza. Dengan positif anti-HCV dan ujian kuantitatif memberi kesan positif pada kira-kira 75% kes. Hasilnya, hasil ini dapat diperolehi hampir 95% dari kes-kes pada pesakit dengan hepatitis C. akut atau kronik. Ujian sedemikian digunakan dalam diagnosis jangkitan akut, serta pesakit immunodeficient, yang ujian antibodi memberikan hasil yang negatif, tetapi ada yang disyaki jangkitan HCV.

Ujian kualitatif lebih sensitif, had lebih rendah adalah 100 RNA salinan per ml. Digunakan untuk menubuhkan diagnosis jangkitan HCV akut, membuat ujian darah untuk HCV. Hasil positif boleh dikesan dalam tempoh dua minggu pertama selepas jangkitan. Ujian kualiti adalah berbeza kerana ia juga boleh memberikan hasil positif palsu atau palsu.

Ujian darah HCV: apakah maksudnya dan kapan ia ditetapkan?

Ujian darah untuk HCV adalah salah satu kaedah untuk mendiagnosis virus hepatitis C. Ujian ini ditetapkan untuk kehadiran gejala hepatitis C, tahap transaminase hepatik, serta pemeriksaan orang yang berisiko terjangkit hepatitis virus. Dalam kes kedua, bersama dengan ujian darah untuk HCV, ujian darah HBs Ag dilakukan.

HCV (virus hepatitis C virus hepatitis C) adalah milik keluarga flaviviruses. Ia pertama kali ditemui pada tahun 1988 oleh sekumpulan penyelidik dari syarikat bioteknologi Chiron Amerika. Genom HCV diwakili oleh molekul RNA, jadi kadar mutasi virus sangat tinggi. Pada orang yang mempunyai virus hepatitis C, zarah virus dikesan, genomnya berbeza antara satu sama lain dengan 1-2%. Ciri-ciri populasi virus ini membolehkan ia berlipat ganda dengan jayanya walaupun reaksi pelindung imuniti manusia. Perbezaan dalam genom virus boleh menjejaskan jangkitan dan hasil rawatan.

Menurut Pertubuhan Kesihatan Sedunia, hari ini, kira-kira 150,000,000 orang dijangkiti virus HCV, dan setiap tahun virus hepatitis C menyebabkan lebih daripada 350,000 pesakit mati.

Kaedah penghantaran hepatitis C

Virus hepatitis C ditularkan dari darah yang dijangkiti, contohnya, kepada penerima dari penderma darah atau organ, kepada bayi dari ibu yang dijangkiti, semasa hubungan seksual, menggunakan jarum tidak steril dalam kemudahan perubatan dan instrumen untuk tatu dan menindik dalam salun.

Penyakit ini boleh berlaku dalam bentuk akut yang berlangsung selama beberapa minggu dan kronik, yang boleh mengakibatkan kanser atau sirosis hati.

Ujian darah HCV: apakah maksudnya dari segi imunologi?

Ujian darah untuk HCV didasarkan pada pengesanan immunoglobulins khusus kelas IgG dan IgM, oleh itu jenis penyelidikan ini kadang-kadang dipanggil ujian darah anti-HCV. Imunoglobulin adalah protein khusus sistem imun, mereka dihasilkan oleh limfosit B sebagai tindak balas terhadap pengesanan protein asing di dalam badan. Apabila dijangkiti virus hepatitis C, immunoglobulin dihasilkan kepada protein sampul virus, protein inti nucleocapsid, dan protein NS bukan struktur. Kemunculan antibodi pertama kepada virus tidak berlaku lebih awal daripada 1-3 bulan selepas jangkitan. Doktor boleh menentukan fasa jangkitan (akut, laten atau mengaktifkan semula) menggunakan antibodi yang dikesan. Antibodi spesifik untuk hepatitis C boleh dikesan walaupun selepas 10 tahun selepas penyakit ini, tetapi kepekatan mereka rendah dan mereka tidak dapat melindungi daripada reinfeksi dengan virus.

Tafsiran keputusan analisis

  • Ujian darah HCV positif. Apa maksudnya? Hasil ini menunjukkan penyakit hepatitis C dalam bentuk akut atau kronik atau penyakit yang sebelum ini dipindahkan.
  • Ujian darah HCV negatif. Apa maksudnya? Tidak ada virus hepatitis C dalam darah atau jangkitan yang berlaku baru-baru ini, jadi tidak ada antibodi lagi. Dalam sesetengah pesakit, antibodi untuk virus ini tidak dihasilkan sama sekali. Senario penyakit ini disebut seronegatif, ia berlaku dalam 5% kes.
  • PCR untuk RNA HCV tidak menunjukkan virus; ujian darah HCV positif sebelum ini diperolehi. Apa maksudnya? Hasil ujian darah untuk HCV adalah positif palsu, sebab ini dapat menjadi beberapa jangkitan, neoplasma, penyakit autoimun.

Antibodi HCV dikesan dalam darah, apa maksudnya?

Natalka

Antibodi untuk virus hepatitis C (anti-HCV) adalah satu kaedah untuk mendiagnosis jangkitan hepatitis C dengan mengesan dalam darah antibodi IgG dan IgM (jumlah antibodi spesifik yang dihasilkan untuk protein virus hepatitis C oleh ELISA). Biasanya, antibodi terhadap virus hepatitis C tidak hadir dalam darah.
Pengesanan jumlah antibodi (anti-HCV) membolehkan diagnosis hepatitis C bermula 3-6 minggu atau lebih selepas jangkitan. Walau bagaimanapun, pengesanan antibodi oleh ELISA adalah pemeriksaan dan tidak mencukupi untuk membuat diagnosis hepatitis C virus dan memerlukan pengesahan oleh kaedah imunoblot.

Julia

Tidak seperti HBV, dalam diagnosis yang mana penanda antigen dan antibodi diambil kira, dengan HCV, hanya antibodi yang dikesan oleh ELISA. Antigen HCV, jika mereka memasuki darah, dalam kuantiti yang tidak terperangkap. Antigen HCV dapat dikesan dalam spesimen biopsi hati menggunakan kaedah imunohistokimia. Ini mengehadkan keupayaan untuk menilai kursus dan aktiviti proses berjangkit.
Baru-baru ini, petunjuk telah muncul mengenai perkembangan pendekatan baru terhadap petunjuk antigen HCV dalam darah. Tahap pertama adalah pelepasan antigen dari struktur selular dengan serum lysing, yang kedua ialah penangkapan antigen menggunakan antibodi monoklonal tertentu. Pengenalan kaedah ini ke dalam amalan klinikal bertujuan untuk memperkaya kemungkinan kemungkinan mendiagnosis dan memantau perjalanan HCV.
Kebanyakan anti-HCV (kecuali antibodi untuk kelas M terasAg) tidak menunjukkan replikasi virus yang berterusan, tidak mencirikan aktivitinya, dan mungkin sesuai dengan jangkitan selepas. Ia juga perlu mengambil kira bahawa dalam penerima yang telah ditransfusikan dengan darah yang dijangkiti, penderma anti-HCV dapat dikesan, dengan satu petunjuk yang tidak semestinya menunjukkan jangkitan selepas transfusi HCV. Petunjuk anti-HCV terutama menyelesaikan masalah diagnosis etiologis, tetapi tidak mencirikan jangkitan (akut, kronik) dan tidak menyelesaikan masalah prognosis. Pada pesakit dengan HCV kronik, anti-HCV didapati dalam darah bukan sahaja dalam bentuk bebas, tetapi juga dalam komposisi kompleks imun yang beredar. Kandungan mereka adalah lebih tinggi dengan perkembangan hepatitis HBV / HCV campuran.
Antibodi dihasilkan untuk setiap protein virus yang terletak di kawasan struktur dan bukan struktur HCV. Ini menentukan kekhususan yang tidak sama rata dan, dengan itu, kandungan maklumat diagnostik yang berlainan dalam paparan. Untuk penunjuk tanda-tanda anti-HCV, kaedah ELISA digunakan, dan kaedah immunoblot (RIBA) digunakan sebagai ujian rujukan pengesahan. Sistem ujian pertama berdasarkan petunjuk antibodi ke C-100-3 dalam ELISA dengan cepat menjadi praktik klinikal, epidemiologi, dalam pemilihan penderma. Walau bagaimanapun, ia memungkinkan untuk menangkap antibodi di zon yang hanya mencatatkan 12% daripada poliprotein virus, dan hanya di kawasan bukan struktur (NS3, NS4). Di samping itu, antigen rekombinan tiruan C-100-3 tidak sepenuhnya bersamaan dengan protein virus semulajadi, yang menentukan ketahanan immunogeniknya.
Antibodi ke C-protein (teras Ag) dengan bantuan antigen C-100-3 tidak terperangkap sama sekali. Kesemua ini telah ditentukan khusus spesifik rendah terhadap tanda-tanda anti-HCV dan sejumlah besar hasil negatif palsu, terutamanya dalam fasa HCV kronik. Pada pesakit yang mengalami hipergammaglobulinemia yang teruk, sebaliknya, ujian C-100-3 sering memberikan hasil positif palsu. Apabila memaparkan antibodi kepada C-100-3, masalah tertentu timbul apabila menyelesaikan masalah diagnosis pembezaan HCV kronik dengan hepatitis autoimun, cryoglobulinemia, dan penyakit kolagen.
Sistem ujian generasi ke-2 membolehkan untuk menangkap antibodi untuk protein di kawasan yang berlainan daripada genom, bukan sahaja bukan struktur, tetapi juga kawasan struktur. Keuntungan mereka adalah terutamanya kekhususan yang tinggi, serta kemungkinan gambaran yang lebih lengkap dari spektrum antigen HCV. Penggunaan sistem ujian generasi ke-2 membolehkan kami untuk meningkatkan pemilihan penderma dan mengurangkan ancaman pembangunan HCV selepas transduksi.
Walau bagaimanapun, apabila menggunakan sistem ujian generasi ke-2, keputusan negatif palsu tidak dikecualikan, khususnya, pada pesakit dengan genotip HCV yang tidak biasa untuk rantau ini. Sistem ujian yang paling maju generasi ke-3.
Keterbatasan penyelidikan telah dipertingkatkan dengan penilaian menyeluruh terhadap pelbagai anti-HCV, semestinya di bawah kawalan dinamik. Sistem pengawasan ini membolehkan anda untuk menangkap perubahan dalam nisbah antibodi kepada antigen HCV yang berbeza.

Evgeny Stefantsov

Anak lelaki itu menemui AT k HCVAg. Dan HB s Ag tidak dikesan, boleh ada ralat. Dan apa yang lebih baik untuk lulus analisis untuk diagnosis yang tepat? Anak lelaki berusia 27 tahun tidak menggunakan dadah yang pernah ada. Darah didermakan 2 kali di bandar Tambov untuk HIV dan di sungai. P. Inzhavino dalam pemeriksaan perubatan di tentera, dan kemudian meletakkan diagnosis sedemikian.

Hepatitis Anti HCV-total (positif) Berikan nasihat sila!

Saya dan isteri saya diperiksa, ujian menunjukkan virus hepatitis. Saya mempunyai jumlah anti-HCV positif. Otr. Isteri saya juga. Betapa berbahaya adalah berapa banyak masa untuk sembuh? Berapakah kosnya? Dan bagaimana pula dengan kerja, adakah mungkin untuk bekerja semasa tempoh rawatan? Rasa hebat!

P ke

Anti-HCV hadir dalam kedua-dua akut (mereka boleh dikesan dari 4-6 minggu selepas jangkitan) dan dalam hepatitis kronik. Jumlah anti-HCV juga dijumpai pada mereka yang telah mengalami hepatitis C dan pulih sendiri. Penanda ini boleh ditemui pada orang tersebut untuk 4-8 ​​tahun atau lebih selepas pemulihan. Oleh itu, ujian anti-HCV positif tidak mencukupi untuk menubuhkan diagnosis. Melawan latar belakang jangkitan kronik, jumlah antibodi dikesan secara berterusan, dan selepas rawatan yang berjaya, mereka berterusan untuk masa yang lama (terutamanya disebabkan oleh IgG teras anti-HCV, mereka ditulis di bawah), manakala tititer mereka secara beransur-ansur berkurangan.

Catherine Gustova

Hepatitis C disebarkan melalui darah dan cecair badan melalui laluan parenteral, seksual dan transplacental. Kumpulan berisiko tinggi adalah individu yang mengamalkan penyalahgunaan dadah secara intravena, seks rontok, serta profesional perubatan, pesakit yang memerlukan hemodialisis atau pemindahan darah, tahanan. Menembusi ke dalam badan, HCV memasuki makrofag darah dan hepatosit hati, di mana ia mereplikasi. Kerosakan pada hati berlaku terutamanya disebabkan oleh lisis imun, dan virus juga mempunyai kesan sitopatik langsung. Kesamaan antigen virus dengan antigen sistem histokompatibiliti manusia menyebabkan berlakunya tindak balas autoimun ("sistemik"). Program manifestasi sistemik jangkitan HCV boleh menyebabkan tiroiditis autoimun, sindrom Sjogren, idiopatik trombositopenic purpura, glomerulonephritis, rheumatoid arthritis, dan sebagainya. Berbanding dengan hepatitis virus lain, hepatitis C mempunyai gambaran klinikal yang kurang jelas, selalunya menjadi kronik. Dalam 20-50% kes, hepatitis C kronik membawa kepada perkembangan sirosis hati dan dalam 1.25 - 2.50% - kepada perkembangan karsinoma hepatoselular. Komplikasi autoimun berlaku dengan frekuensi tinggi.
Saya mahu kecewa awak! Hepatitis C tidak dapat disembuhkan seperti jangkitan HIV! Anda boleh hidup dengan dia selama bertahun-tahun! Tetapi sirosis mungkin berlaku lambat laun. Ia bergantung pada siapa yang anda bekerja. Sama ada diagnosis anda akan menjejaskan kerja anda tidak diketahui. tetapi rakan-rakan anda lebih baik tidak bercakap tentang diagnosis ini.

Kostarev konstantin

Perlu diperhatikan bahawa hanya sekitar 20% orang yang pernah dijangkiti hepatitis C, menghadapi jangkitan itu sendiri. Oleh itu, malangnya, dalam kebanyakan kes, kehadiran antibodi kepada HCV menunjukkan hepatitis C virus kronik (CVHC).

Olga

Kepada semua perkara di atas, tambahkan bahawa selepas pengesanan antibodi, perlu untuk menguji analisis kehadiran virus dalam darah. Analisis ini dipanggil RNA HCV oleh PCR, jika positif, maka perlu melakukan genotyping, iaitu mengenal pasti genotip virus (masa dan kos rawatan bergantung kepadanya). Jika negatif, maka mungkin anda telah menjadi salah satu daripada 15-20% orang yang bertuah yang mempunyai penyembuhan diri. Tetapi dalam kes ini, anda perlu mengawal keadaan dan sekurang-kurangnya sekali setahun anda perlu mengambil analisis oleh PCR.
Jika anda masih mempunyai hepatitis, maka anda tidak perlu kecewa. Dia berjaya dirawat. Rawatan itu sukar, tetapi ia mungkin untuk berfungsi jika kerja itu bukan di antara orang yang berbahaya yang memerlukan kepekatan khusus. Anda tidak boleh terbang ke angkasa tepat)))

Kit immunoassay enzim untuk mengesan imunoglobulin kelas G dan M kepada protein individu virus hepatitis C (teras, NS3, NS4, NS5) (Spektrum anti-HCV terbaik)

Syarat penyimpanan Bahan reagen untuk pengesanan immunofermental imunoglobulin kelas G dan M kepada protein individu virus hepatitis C (teras, NS3, NS4, NS5) (Spektrum anti-HCV terbaik)

Jauhkan daripada kanak-kanak.

Perintah produk perubatan di farmasi:

Tinggalkan komen anda

  • Kit pertolongan cemas
  • Kedai dalam talian
  • Mengenai syarikat
  • Hubungi Kami
  • Kenalan penerbit:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • E-mel: [email protected]
  • Alamat: Russia, 123007, Moscow, st. Mainline ke-5, 12.

Kami berada dalam rangkaian sosial:

© 2000-2018. REGISTRY OF MEDIA RUSSIA ® RLS ®

Semua hak terpelihara.

Penggunaan bahan komersil tidak dibenarkan.

Maklumat yang dimaksudkan untuk profesional penjagaan kesihatan.

Diagnosis makmal hepatitis C

MI Mikhailov, Institut Epidemiologi dan Mikrobiologi. N.F. Gamalei RAMS, Moscow

Apabila membuat diagnosis "hepatitis C", faktor-faktor berikut yang paling penting perlu dipertimbangkan:

  • penunjuk aktiviti enzim "hati";
  • kehadiran atau ketiadaan penanda jangkitan dengan virus hepatitis C (HCV) dan virus hepatotropik lain;
  • data sejarah epidemiologi;
  • hasil pemeriksaan klinikal pesakit. Hanya perakaunan komprehensif bagi faktor-faktor ini membolehkan untuk mendiagnosis penyakit ini dengan tahap kebolehpercayaan yang tinggi. Pekerja makmal mesti memberikan maklumat objektif mengenai spektrum antigen dan antibodi virus yang dikenal pasti, serta RNA HCV, membolehkan klinisi, pekerja khidmat transfusi darah dan ahli epidemiologi menyelesaikan masalah mereka. Selalunya ia adalah:
  • pengenalpastian orang dengan HCV untuk mengurangkan tahap hepatitis C selepas transfusi;
  • diagnosis dan perbezaan antara hepatitis C akut dan kronik;
  • prognosis penyakit;
  • pelantikan, penilaian dan ramalan keberkesanan terapi;
  • kajian mengenai penyebaran HCV dalam populasi dan pelbagai kumpulan populasi.
    Dalam kes ini, bidang kerja utama yang dilakukan oleh kakitangan makmal adalah:
  • pembangunan dan pemilihan kaedah yang paling bermaklumat untuk mengenal pasti penanda jangkitan HCV;
  • penentuan kriteria untuk penilaian objektif hasil yang diperoleh;
  • pembangunan algoritma penyelidikan makmal yang optimum;
  • pelaksanaan sistem untuk meningkatkan kualiti pengesanan penanda jangkitan HCV.

    Asas diagnosis makmal hepatitis C adalah pengetahuan tentang HCV, replikasi, maklumat mengenai dinamika kemunculan dan penghilangan penanda jangkitan, serta kaedah imunokimia dan molekul-biologi moden untuk pengesanan antigen, antibodi dan asid nukleik.

    Virus hepatitis C. HCV pertama kali dikenalpasti pada tahun 1988, apabila sekumpulan penyelidik yang diketuai oleh M. Houghton dan Choo Q.L menggunakan kaedah penyelidikan molekul-biologi baru, mengkloning dan menjejaskan genom virus [I]. Satu zarah virus hepatitis C mempunyai bentuk sfera dengan garis pusat purata kira-kira 50 nm [2,3]. Percubaan untuk mengesan dan mengkaji struktur virus hepatitis C telah dibuat semenjak penemuan virus itu, namun masih terdapat hasil yang tidak didokumentasikan dengan baik dari kajian ini, yang mungkin disebabkan oleh kesulitan mengumpul zarah virus dalam jumlah yang diperlukan.

    VGS adalah satu-satunya ahli genus Hepacivirus dalam keluarga Flaviviridae, termasuk virus seperti virus cirit buncit dan demam babi (genus Pestivirus) dan virus demam kuning, virus Denge dan GB: GBV-A, GBV-B dan GBV-C / HGV (genus Flavivi-rus). Struktur virus hepatitis C boleh diwakili seperti berikut (Skema No. 1). Nukleocapsid mengandungi RNA virus hepatitis C. Dari atas, nukleocapsid disalut dengan membran lipid dengan menyelubungi di dalamnya menyelubungi protein yang dikodkan oleh RNA HCV. Genom virus diwakili oleh molekul RNA linier tunggal yang mempunyai polaritas positif, dengan panjang kira-kira 9.600 nukleotida. Organisasi genom HCV serupa dengan flaviviruses lain. Ia membezakan dua zon yang menodai protein struktur dan bukan struktur (berfungsi). Gen pengekodan protein struktur terletak di 5 'rantau genom virus, dan bukan struktur di 3 rantau'. Gen HCV mempunyai satu bacaan bacaan terbuka (ORS), satu polipeptida tunggal (kira-kira 3000 asid amino), yang dipotong menjadi protein struktur dan bukan struktur oleh protease sel dan selular.

    Rajah. 1. Unsur struktur HCV

    Struktur protein termasuk protein yang dikodkan oleh RNA HCV, Core, El, dan E2. Tiga bentuk protein HCV C dikesan: penuh (p21) dengan berat molekul 21 kD, dipotong (p19) dan bentuk (p16) yang terdapat dalam nucleoli hepatosit yang dijangkiti. Di permukaannya, C-protein membawa pelbagai epitope B-sel yang sangat konservasi, yang kewujudannya sangat penting untuk mengesan antibodi kepada HCV dalam proses diagnosis makmal hepatitis C.

    Zon RNA HCV E1 dan E2 menyandikan protein dengan berat molekul 31 dan 70 kD. Protein ini mempunyai beberapa tapak N-glikosilasi; dalam protein E1, sehingga 6 tapak tersebut ditakrifkan, dan dalam E2 - 11. Dalam bahagian E2 terdapat maklumat mengenai protein kecil - p7, yang tidak terdapat dalam struktur virus.

    Penentuan kawasan yang terletak lebih dekat dengan RNA HCV 3'-end - sebagai zon yang membawa maklumat mengenai protein bukan struktur virus, menunjukkan bahawa protein ini bukan komponen struktur zarah virus. Dalam zon bukan struktur RNA HCV, terdapat bahagian yang ditetapkan sebagai: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A dan NS5B. Kebanyakan protein yang dikodkan oleh zon bukan struktur RNA HCV diperlukan untuk replikasi virus.

    Satu analisis perbandingan urutan nukleotida RNA isolat HCV yang diperolehi di rantau yang berlainan di dunia dan walaupun dalam perjalanan penyakit dari pesakit yang sama mendedahkan ciri utama virus ini - heterogenitas tinggi RNA. Kedudukan variasi genetik yang signifikan dari RNA HCV membentuk asas teori yang menerangkan: pengangkutan jangka panjang (kadang-kadang seumur hidup) virus, perkembangan penyakit kronik yang kerap, kesulitan dalam terapi dan penciptaan vaksin yang efektif. Perbezaan yang paling ketara dalam urutan RNA HCV tertumpu di bahagian terminal N2 di rantau E2, yang ditetapkan sebagai "kawasan hypervariable" (HVR) [4].

    Pada masa ini, 6 genotip utama dan lebih daripada 100 subtipe HCV telah dikenalpasti. Genotip 1a, 1b, 2a, 2b, 2c dan Za membentuk lebih daripada 90% isolat HCV yang terdapat di Amerika Utara dan Selatan, Eropah, Rusia, China, Jepun dan Australia / New Zealand [5]. Genotip 4, 5a dan 6 masing-masing direkodkan di Tengah dan Selatan Afrika, dan Asia Tenggara. Di Rusia dan negara-negara CIS, kekuasaan genotip 16 didaftarkan (tidak kurang daripada 68.9%) [6,7]. Adalah dipercayai bahawa pesakit yang dijangkiti genotip 1 (terutama 1b) merespon lebih teruk daripada rawatan daripada pesakit yang dijangkiti genotip lain virus.

    Dalam pesakit, HCV beredar sebagai populasi zarah virus di mana genom berbeza antara satu sama lain sebanyak 1-2% (dari kekhususan kuasi) akibat mutasi yang terkumpul semasa jangkitan dan / atau memasuki tubuh pesakit semasa jangkitan. Bentuk mutan ini boleh menyumbang kepada replikasi yang lebih aktif atau boleh membantu virus mengelakkan tindak balas imun badan dan berpotensi menjejaskan hasil jangkitan akut, perbezaan dalam perjalanan penyakit dan tindak balas terhadap terapi interferon [8].

    DEFINISI ANTI-HCV. Selepas penemuan virus HCV dan menentukan peranannya dalam pembangunan hepatitis pasca transfusi - "tidak A atau B", para penyelidik ditugaskan untuk membangunkan kaedah yang mampu mengesan orang dengan HCV dan sesuai untuk mendiagnosis hepatitis C. akut dan kronik Ditemukan bahawa antigen HCV beredar di kepekatan yang sangat rendah, dan jelas bahawa tahap metodologi pada akhir 80-an abad ke-20, yang digunakan untuk mengesan antigen virus, jelas tidak mencukupi.

    Pada tahun 1989, sekumpulan penyelidik dari Chiron Corporation, di bawah arahan Q-L.Choo, mengkloning RNA HCV dan mendapatkan oligopeptida imunoreaktif yang bertindak balas dengan antibodi yang beredar dalam darah pesakit dengan Hepatitis kronik "tidak A atau B". Oligopeptida ini menjadi asas ubat diagnostik untuk mengesan antibodi kepada HCV. Ini menentukan kemajuan pesat dalam pembangunan dan pengeluaran produk diagnostik komersial. Kaedah utama yang digunakan untuk mengesan anti-HCV, telah menjadi ujian imunosorben berkaitan enzim, sebagai satu kaedah yang memenuhi keperluan penjagaan kesihatan praktikal - iaitu. Ia mempunyai sensitiviti tinggi, kekhususan dan kemudahan pelaksanaan.

    Memandangkan HCV berterusan dalam darah pesakit dengan hepatitis C akut dan kronik serentak dengan anti-HCV, perhatian pemaju ubat-ubatan diagnostik memberi tumpuan kepada pembangunan sistem ujian untuk mengesan antibodi yang menyediakan pengesanan paling lengkap pembawa virus dan diagnosis awal jangkitan akut yang paling awal. Pelbagai antigen dan penentu antigen yang dikodkan oleh zon struktur dan bukan struktur RNA HCV telah menentukan arah dalam reka bentuk produk diagnostik dengan memilih dan mengatur oligopeptida yang digunakan untuk menciptanya. Sepanjang masa yang telah berlalu sejak penemuan HCV, sistem diagnostik tiga generasi telah dicipta (Jadual 1).

    Jadual 1
    Persediaan diagnostik untuk mengesan anti-HCV [9]

    Peptida yang digunakan
    zon RNA HCV di mana
    mereka dikodkan

    pengesanan pembawa%
    HCV

    Pertama kalinya
    mengenal pasti
    anti-HCV dari
    mula jaundis

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Teras
    C200 NS3 dan NS4
    SZZs NS3
    Dari 100-3 NS4

    C22-3 Teras
    C200 NS3 dan NS4
    SZZs NS3
    Peptide NS5

    Pengenalan peptida tambahan, terutamanya c22-3 (Teras), ke dalam persediaan diagnostik generasi ke-2 dan ke-3 yang dibenarkan untuk menyelesaikan masalah utama, iaitu untuk meningkatkan kepekaan, kekhususan dan, yang paling penting, pengesanan anti-HCV. Terima kasih kepada diagnostik generasi ke-3, sehingga 97% pembawa HCV dapat dikesan. Pada masa yang sama, perbincangan tertentu disebabkan oleh keputusan untuk memperkenalkan peptida diagnostik yang dikodkan oleh rantau H5V RNA HNV. Menurut beberapa penyelidik, kehadiran peptida ini tidak penting untuk meningkatkan kualiti ubat diagnostik. [10,11]. Walau bagaimanapun, antibodi kepada NS5 dapat dikesan lebih awal dalam jangkitan, yang meningkatkan kualiti diagnosis makmal hepatitis C. [12].

    Kini di seluruh dunia, termasuk Rusia, produk diagnostik generasi ketiga digunakan. Peptida yang digunakan dalam persediaan diagnostik diperoleh menggunakan teknologi rekombinan (contohnya, ujian diagnostik firma: Persediaan diagnostik, Nizhny Novgorod, Vektor, Novosibirsk, Roche, Abbott, dll), atau sintetik ( 000 MTS "Avicenna", St Petersburg; "Organon", dll.). Diagnostik, di mana kedua-dua jenis peptida digunakan secara serentak, telah ditetapkan sebagai ubat generasi ke-4. Menurut ciri-ciri mereka, ubat-ubatan ini tidak mempunyai perbezaan yang signifikan. Ujian perbandingan yang dilakukan secara kerap oleh Kementerian Kesihatan Rusia menunjukkan kepekaan yang serupa dengan produk diagnostik pengeluar domestik dan asing.

    Telah ditubuhkan bahawa penggunaan diagnostik generasi ke-3 untuk mengesan anti-HCV di kalangan penduduk immunokompeten (sebagai contoh, penderma darah) dianggarkan pada 98.8-100%. Pada masa yang sama, antara individu imunokompromi, seperti pesakit selepas pemindahan buah pinggang, sumsum tulang atau orang yang dijangkiti HIV, angka ini jauh lebih rendah - 50 - 95% [12]. S.George et al. [13] menunjukkan bahawa dalam 8.4% pesakit dengan jangkitan HIV, hasil negatif palsu pengesanan anti-HCV direkodkan. Selain itu, dalam pesakit sedemikian kesan seroreversi boleh didaftarkan semasa pemerhatian, iaitu. pendaftaran keputusan positif selepas tempoh anti-HCV seronegatif [14].

    Salah satu masalah yang paling penting ketika melakukan penelitian untuk kehadiran anti-HCV adalah hasil positif palsu. Penampilan mereka mungkin disebabkan oleh interaksi yang tidak spesifik terhadap komponen reaksi, kemungkinan tindak balas balas dengan antigen virus yang lain, dan banyak lagi faktor lain. Tahap hasil positif palsu dalam mengesan anti-HCV dengan pelbagai ubat diagnostik boleh mencapai 10-20% [15,16]. Tahap peningkatan hasil seperti itu diperhatikan di kalangan pesakit dengan penyakit onkologi dan autoimun, orang yang mempunyai keadaan imunodefisiensi dan pesakit dengan sifilis [16,17]. Kewujudan hasil positif palsu dihadapi oleh pekerja makmal dengan tugas membezakannya daripada pengesanan sebenar anti-HCV. Untuk menyelesaikan masalah ini ialah pengesanan RNA serum HCV dalam sampel darah. Walau bagaimanapun, hasil negatif pengesanan RNA HCV tidak mencadangkan kehadiran pengesanan palsu palsu anti-HCV. Perlu diingat bahawa anti-HCV dapat mengedarkan secara terpisah dalam darah pesakit yang telah pulih dari hepatitis C akut (10-15%) atau yang telah menghilangkan RNA HCV akibat terapi.

    UJIAN PEMERIKSAAN (TAMBAHAN). Ujian tambahan (Tambahan) telah dibentuk untuk membezakan antara sampel positif palsu dan sampel yang sebenarnya mengandungi antibodi kepada HCV. Selalunya dalam ujian ini prinsip immunoblot digunakan [sebagai contoh, ujian RIBA ("Diagnostik Ortho-Klinikal"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika) apabila antigen yang dikodkan oleh zon berbeza RNA HCV terserap pada membran nitrocellulosa pada membran nitroselulosa. Anti-HCV berinteraksi dengan antigen terserap menggunakan antibodi berlabel enzim terhadap manusia Ig G dan pengesanan seterusnya menggunakan kompleks substrat. Selain imunoblot, persediaan diagnostik untuk mengesan anti-HCV terhadap antigen spesifik yang dikodkan oleh zon berbeza RNA HCV juga digunakan sebagai ujian tambahan ["Spektrum 4" (Imbio, Nizhny Novgorod; RecombiBest ANTI-HCV-SPECTR) - Vektor Terbaik ", Novosibirsk; ELISA- Anti-NSU-Spectr, NPO" Sistem Diagnostik ", Nizhny Novgorod].

    Pengembangan dan pelaksanaan ujian ini berjalan seiring dengan pengenalan ujian skrining untuk mengesan anti-HCV, mengulangi prinsip spektrum peptida yang diperluas yang digunakan dalam setiap produk diagnostik generasi berikutnya. Oleh itu, diagnosis RIBA-III berbeza dari generasi sebelumnya dengan penambahan peptida yang dikodkan oleh zon NS5. Prinsip untuk mengesahkan pengesanan positif terhadap anti-HCV, terutamanya termasuk: kemungkinan (dalam beberapa kes) untuk mendapatkan hasil yang lebih tepat daripada tindak balas enzimatik apabila berinteraksi dengan peptida individu, serta menggunakan spektrum peptida diperluas dalam diagnostik yang tidak digunakan dalam ujian skrining. Hanya pengenalan peptida baru boleh meningkatkan nilai diagnostik ujian pengesahan.

    Tafsiran hasil yang diperoleh, sebagai contoh, dalam ujian seperti RIBA-III, termasuk tiga jawapan yang mungkin: hasil positif, negatif, dan tidak menentu. Yang terakhir mereka dikeluarkan dalam kes ketiadaan petunjuk yang jelas (mengikut arahan yang dilampirkan pada kit diagnostik), membolehkan anda untuk menentukan hakikat kehadiran atau ketiadaan anti-HCV dalam sampel yang di bawah kajian. Nisbah spektrum tindak balas yang direkodkan semasa menjalankan ujian pengesahan bervariasi bergantung pada ciri-ciri kelompok pesakit yang anti-HCV dikesan terutamanya [18]. Menurut J.M. Pawlotsky et al. [19], separuh daripada keputusan dianggap sebagai "tidak ditentukan", adalah mungkin untuk mengesan HCV RNA. Pada pendapat kami, legitimasi tindak balas - "keputusan yang tidak menentu untuk mengesan anti-HCV," yang dikeluarkan oleh pekerja makmal kepada seorang doktor, terbukti bukan sahaja semasa menjalankan ujian pengesahan, tetapi juga secara rutin menguji kehadiran anti-HCV. Keperluan untuk menafsirkan keputusan tersebut adalah gambaran keadaan semasa diagnosis makmal hepatitis C.

    PENENTUAN ANTI-HCV IgM. Pada masa ini, kit diagnostik untuk mengesan IgM anti-HCV oleh syarikat telah dicipta dan sedang dihasilkan secara komersil: "Vector Best"; "Sistem Diagnostik"; Imbio, Abbott, dan lain-lain. Pada peringkat reka bentuk kit diagnostik, kit ELISA telah dibuat, berdasarkan peptida yang dikodkan oleh rantau HCV yang berbeza [20]. Pilihan dibuat pada peptida yang dikodkan oleh rantau Core RNA HCV dan pengesanan antibodi IgM kepadanya. Seperti penggunaan ujian untuk mengesan anti-HCV (IgG), keputusan positif palsu boleh direkodkan dalam ujian anti-HCV IgM. Menurut Stevensona D.L. et al. [21], sehingga 70% pesakit dengan hepatitis C kronik dengan kehadiran IgM anti-HCV serentak mempunyai tahap peningkatan faktor rheumatoid, yang menyumbang kepada penampilan hasil positif palsu. Walau bagaimanapun, menurut Pawlotsky J.M, kehadiran faktor rheumatoid tidak menjejaskan kualiti pengesanan IgM anti-HCV [22].

    PENENTUAN ANTIGENS HCV. Keupayaan untuk mengesan antigen HCV menarik perhatian penyelidik sejurus selepas penemuan virus tersebut. Kemungkinan utama pengujian mereka ditunjukkan oleh K. Krawczynski et al. [23], yang immunohistokimia mengesan antigen HCV dalam tisu hati, membuktikan kekhususan cahaya immunofluorescent. Penggunaan antibodi poly- dan monoklonal kepada pelbagai antigen HCV telah mewujudkan kehadiran HCV teras Ag, antigen dikodkan NS3 dan NS4 zon HCV RNA dalam nukleus dan sitoplasma hepatosit, dalam 60-90% daripada pesakit yang kronik HS [24].Walau bagaimanapun, kajian lanjut telah menunjukkan bahawa Antigen HCV dapat dikesan dalam kurang dari 5% sel hati.

    Sistem ujian diagnostik pertama ("Ortho Antibody to Core Antigen (Murine Monoclonal) Sistem Ujian EL1SA" dan "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") untuk mengesan antigen HCV muncul di pasaran untuk persiapan imunobiologi pada tahun 1999. Sasaran untuk pengesanan adalah antigen teras HCV, yang ditentukan menggunakan fasa elisa ELISA fasa yang direka berdasarkan antibodi monoklonal. Kajian pertama mengenai penggunaan ujian ini menentukan kepekaan tinggi, kekhususan, dan prospek permohonan, terutamanya dalam perkhidmatan pemindahan darah [25,26]. Dipasang:

  • keupayaan untuk menentukan Core Ag HCV dalam serum atau plasma;
  • kekhususan pengesanan Core Ag HCV;
  • kehadiran orang dengan antigen yang beredar dalam seronegatif darah untuk anti-HCV;
  • kerap (90.3%) pengesanan Core Ag HCV dalam serum dengan kehadiran anti-HCV dan RNA HCV [25];
  • korelasi langsung antara kepekatan RNA HCV dan pengesanan Core Ag HCV [25];
  • penguncupan fasa "tetingkap" - dari saat jangkitan ke hasil positif pertama pengesanan anti-HCV. Telah ditentukan bahawa Core Ag HCV dapat dikesan dalam 83% kes (n = 24) keesokan harinya selepas pengesanan pertama RNA HCV [26] dan panjang (26 hari secara purata) sebelum penampilan anti-HCV [27].

    KAEDAH PENETAPAN RNA HCV. Tahap moden diagnosis makmal hepatitis C dapat dicirikan sebagai tahap awal penggunaan biologi molekul secara meluas untuk mengesan HCV RNA. Sebilangan besar kaedah pengesanan asid nukleik telah diuji untuk mengesan RNA HCV. Sebilangan besar kajian literatur yang diterbitkan dalam bahasa Rusia [28] dan penerbitan asing [29] ditumpukan kepada prinsip-prinsip merancang produk diagnostik dan penggunaannya untuk mengesan DNA atau RNA virus. Semua kaedah ini boleh dibahagikan kepada dua kumpulan, yang berdasarkan kepada penerapan prinsip-prinsip hibridisasi tanpa penguatan bahagian yang dipilih asid nukleik atau dengan penguatannya, yang dengan ketara dapat meningkatkan resolusi kaedah.

    Kaedah hibridisasi adalah berdasarkan gabungan probe hibridisasi berlabel (kejuruteraan genetik atau struktur molekul sintetik yang mengandungi urutan nukleotida yang melengkapi bahagian RNA yang dipilih). Analisis keputusan dijalankan mengikut intensiti isyarat yang datang dari label dalam komposisi kompleks yang terbentuk.

    Dalam hepatitis C, kaedah pengesanan HCV RNA ini terutama telah digunakan untuk mengenal pasti secara langsung dalam hepatosit, dan dalam ujian yang disebut sebagai in situ hibidization [30]. Kemungkinan pengesanan langsung RNA HCV dalam tisu memungkinkan untuk mengesannya dalam sel darah mononuklear, sel gland saliva dan tisu lain dari pesakit dengan hepatitis C [31,32].

    Kaedah hibridisasi yang digunakan untuk mengesan RNA HCV memungkinkan untuk menunjukkan kehadiran rantai negatif (replicative) RNA HCV, yang menunjukkan replikasi aktif virus [33].

    Kaedah reaksi rantai polimerase kini merupakan teknik teratur yang paling banyak digunakan yang mendasari hampir semua kaedah biologi molekul untuk mengesan RNA HCV. Selain itu, penentuan RNA HCV adalah mungkin dalam bentuk kualitatif dan kuantitatif, yang amat penting untuk pelantikan, pemantauan dan penilaian ke atas keberkesanan terapi yang digunakan.

    Varian utama kaedah ialah:

  • reaksi rantai polimerase (PCR);
  • tindak balas rantai ligase;
  • NASBA;
  • TMA (tindak balas penguatan pengulangan transkripsi, amplifikasi Transkripsi-pengantara).

    Reaksi rantai polimerase ialah kaedah pengesanan HCV RNA, baik di Rusia dan di luar negara. Ia didasarkan pada proses berbilang kitaran, menyerupai replikasi semulajadi asid nukleik, dengan setiap kitaran yang terdiri daripada peringkat berturut-turut.

    Dari bahan yang dikaji (serum atau plasma darah, biopsi hati), RNA HCV diasingkan. Memandangkan asid nukleik HCV diwakili oleh RNA, dan molekul cDNA diperlukan untuk penguatan, menggunakan transkripase enzim terbalik, pembentukan molekul cDNA HCV tunggal terkandas berlaku. Pada peringkat seterusnya, apa yang dipanggil "HCV" dilampirkan pada bahagian tertentu setiap rantai cDNA HCV. Primer adalah oligonukleotida pendek yang saling melengkapi kepada urutan nukleotida yang diketahui. Perbandingan struktur utama rantau 5'UTR genom penebat HCV yang berbeza menunjukkan variabiliti tidak penting (antara genotip, homologi nukleotida - 92-98%, dan dalam genotip 98-99%). Ini menjadikan lebih baik memilih primata dari zon HCV RNA ini dan penggunaannya dalam sistem ujian diagnostik yang dihasilkan di negara kita dan di luar negara.

    Selanjutnya, dengan bantuan polimerase DNA yang bergantung kepada enzim DNA, sintesis segmen DNA baru berlaku. Pada masa ini, bakteria Thermophilus termus (Tth polymerase) atau Thermophilus aquaticus (Taq polimerase) yang paling biasa digunakan sebagai sumber enzim ini. Memiliki kestabilan terma di hadapan ion mangan dan magnesium, enzim ini boleh digunakan secara serentak untuk mensintesis molekul cDNA HCV tunggal terkandas dan menguatkan kawasan cDNA yang dipilih. Pada peringkat akhir satu kitaran tindak balas, menggunakan polimerase DNA, sintesis helai baru crona HCV pelengkap berlaku. Pengulangan pelbagai kitaran tindak balas membawa kepada pengumpulan serpihan cDNA HCV, yang boleh didaftarkan menggunakan elektroforesis gel polyacrylamide diikuti dengan pengesanan visual atau menggunakan hibridisasi dengan probe oligonukleotide, yang meningkatkan kepekaan dan kekhususan produk diagnostik yang digunakan. Penggunaan primer yang dilabelkan dengan enzim membolehkan rakaman hasil PCR menggunakan immunoassay enzim.

    Tujuan yang berterusan untuk penyelidik yang mereka bentuk sistem diagnostik untuk mengesan RNA HCV adalah untuk meningkatkan kepekaan dan kekhususan. Matlamat ini disampaikan oleh varian PCR, yang ditetapkan - "PCR bersarang" (bersarang PCR) [34]. Ciri khas kaedah ini dari "klasik" adalah penggunaan serentak dua pasang primer, salah satunya adalah pelengkap kepada bahagian dalaman amplicon yang diperolehi selepas pusingan pertama amplifikasi. Pada masa yang sama, dipercayai bahawa dengan varian PCR ini terdapat risiko yang lebih tinggi daripada pencemaran sampel, yang boleh mengakibatkan hasil positif palsu [35].

    Keperluan akut untuk penentuan RNA HCV dan kesulitan yang berkaitan dengan pengeluaran berskala besar kit diagnostik yang sangat sensitif dan khusus untuk diagnostik PCR telah menentukan penggunaan meluas persediaan yang dibuat di makmal saintifik. Perbandingan sistem ujian ini, yang dikenali sebagai "rumah" ujian ("dalam ujian rumah"), menunjukkan kepelbagaian yang tinggi dalam kepekaan dan kekhususannya, serta kekurangan reproduktif hasil antara makmal dan satu siri produk diagnostik. Oleh itu, apabila mengendalikan kitaran kualiti "luar" kitaran Eropah yang pertama untuk mengesan HCV RNA (1996) daripada 136 makmal, hanya 22 (16%) dapat menentukan dengan tepat atau tidak adanya RNA virus dalam sampel kawalan yang disediakan [36]. Hasil yang sama dicatatkan di negara kita, semasa kerja sama di bawah sistem kawalan kualiti luaran Persekutuan (2001), apabila daripada 14 makmal yang menyertai hanya 3 (21.4%) dapat menyelesaikan tugas dengan betul [37].

    Sebab-sebab penampilan keputusan palsu-negatif dan palsu-positif pengesanan RNA HCV adalah pelbagai. Untuk hasil negatif palsu:
    - kehilangan atau kemusnahan RNA HCV sebagai persediaan untuk tindak balas bahan klinikal;
    - kehadiran dalam sampel perencat yang mempengaruhi pelbagai komponen PCR. Inhibitor ini diwakili oleh pelbagai bahan kimia atau protein. Sebagai contoh: kehadiran dalam cecair sperma perencat transkripase terbalik tidak membenarkan mengesan RNA HCV dan bercakap tentang kemungkinan menyedari penghantaran seksual hepatitis C [38]; kehadiran hepaprine [39]; tahap cryoglobulin serum yang tinggi [40];
    - tidak mematuhi penyimpanan termal dan pengangkutan bahan klinikal. Untuk hasil positif palsu:
    - pencemaran antara sampel (apabila memproses sampel dan / atau bekerja dengan campuran reaksi), termasuk pencemaran dengan sampel kawalan positif;
    - pencemaran dengan produk pra-amplifikasi (amplicons) yang boleh mencemarkan sampel ujian dan penyelesaian melalui aerosol atau peralatan makmal.

    Pengenalan besar diagnostik PCR oleh definisi RNA HCV telah menetapkan tugas peralihan ke tahap baru penyelidikan makmal untuk pihak berkuasa penjagaan kesihatan. Pengasingan zon terisolasi untuk pelaksanaan tahap utama PCR (untuk penyediaan sampel; penguatan untuk mempertimbangkan hasil yang diperoleh); kit berasingan untuk setiap peringkat pakaian makmal reaksi, pipet automatik; kewujudan kit diagnostik standard dan, yang paling penting, kehadiran kakitangan makmal yang berkelayakan mengurangkan kejadian yang palsu.

    Kit standard yang pertama untuk menentukan RNA HCV ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") telah dikeluarkan pada tahun 1993. Selama bertahun-tahun, kit RNA HCV telah berkembang, tujuan utamanya adalah untuk meningkatkan kepekaan dan kekhususan mereka. Apabila mereka bentuk Amplicor TM HCV, beberapa kaedah asal digunakan untuk mengenal pasti 100 atau lebih salinan HCV RNA per ml, serta menangani kemungkinan kemungkinan pencemaran sampel dan penyelesaian yang digunakan dalam kit. Penggunaan enzim - amperses dan deixiuridine triphosphate (dUTP) memungkinkan untuk memusnahkan kitaran pertama penguatkaan aplicons sebelumnya dengan pencemaran yang mungkin berlaku. Kemusnahan penguatan pada akhir kitaran penguat pertama (pada + 55 ° C) tidak membenarkan enzim untuk memusnahkan larutan terpilih sebagai sasaran. Inovasi utama ialah pengenalan kawalan dalaman. Makna inovasi ini terletak pada pengenalan jujukan yang serupa dengan RNA HCV yang diperkuatkan ke dalam setiap sampel ujian, yang kemudiannya dikesan menggunakan primer yang bersamaan dalam reaksi amplifikasi dalam mod yang sama. Ketiadaan reaksi positif dalam mengesan kawalan dalaman menunjukkan kehadiran hasil negatif palsu terhadap reaksi terhadap kehadiran RNA HCV dalam sampel yang di bawah kajian. Generasi berikutnya didiagnosis dengan ubat, yang ditetapkan sebagai "HCV Amplicor 2.0", yang apabila digunakan, mempunyai had sensitiviti 50 molekul RNA HCV.

    Sistem untuk mengesan HCV RNA menggunakan kit Roche tidak boleh dipertimbangkan secara berasingan daripada peralatan mereka, yang menentukan kualiti ujian yang tinggi. Pemaju kaedah ini berusaha untuk mengautomasikan semua peringkat tindak balas. Perwujudan idea ini adalah sistem "COBASAmpliPrepTM", yang membolehkan anda mengautomasikan sepenuhnya proses mengasingkan RNA, amplifikasi dan pengesanan HCV, dengan itu mengurangkan risiko hasil positif palsu dan palsu, sambil mengekalkan sensitiviti dan kekhususan yang tinggi [41].

    Reaksi rantai ligase untuk pengesanan RNA HHC (LCR). Kaedah ini berdasarkan keupayaan enzim "ligase DNA yang bergantung kepada DNA" untuk menjahit (ligate) rehat ikatan fosfodiester dalam DNA dengan kehadiran ion ATP dan Mg 2+. Seperti "PCR" klasik untuk mengesan RNA HCV, peringkat pertama LCR adalah transkripsi terbalik untuk menghasilkan cDNA HCV. Selanjutnya, DNA ligase mengikat dua pasang primer (pelengkap kepada 5 'zon tanpa kod RNA HCV), yang diperkuatkan lagi. Pengesanan produk penguatan LCR dilakukan dengan mengambil kira tindak balas antigen-antibodi. Setiap satu daripada dua primer dilabelkan dengan hapten yang berbeza. Yang pertama adalah ditangkap oleh antibodi yang terserap pada mikropartikel. Selepas prosedur mencuci menggunakan pasangan antibodi kedua yang dilabel dengan label fluorescent, mereka secara selektif berinteraksi dengan hapten dalam produk penguatan, diikuti oleh reaksi substrat dan mengira fluorimeter.

    Kepekaan kaedah ini adalah kira-kira 200 salinan RNA HCV per ml, yang membolehkannya menggunakan penyelesaian masalah diagnostik klinikal [42]. Pada masa ini, kit diagnostik untuk mengesan HCV RNA berdasarkan LCR dihasilkan oleh Abbott.

    Asid nukleik Pengukuhan Seaquence - Kaedah NASBA untuk pengesanan HCV RNA adalah berdasarkan tindakan serentak tiga enzim: transkripase myeloblastoma burung, RNAase burung dan polimerase RNA T7 [43]. Tidak seperti RT PCR, langkah pertama tidak membalikkan transkripsi RNA HCV. Menggunakan enzim yang digunakan, lebih daripada 10 (9) salinan kawasan cDNA HCV boleh didapati dalam masa 90 minit [44]. Kemungkinan untuk melaksanakan tindak balas pada suhu rendah (+41 C) sangat memudahkan kerja dan menghapuskan keperluan peralatan yang menyediakan perubahan kitaran dalam suhu tinggi. Rekod hasil tindak balas dilakukan menggunakan electrochemiluminescence. Walaupun NASBA adalah dekat dengan RT PCR dalam kepekaannya, kaedah ini tidak digunakan secara meluas untuk mengesan RNA HCV. Pada masa ini, varian kaedah sedang dibangunkan yang menggabungkan prinsip-prinsip NASBA dan "Real-time RT PCR".

    Kaedah penguatan transkripsi-pengantara (TMA) berbeza dari PCR dan LCR terutamanya kerana ia terus menguatkan serpihan RNA HCV, dan bukan cDNA HCV. Pada peringkat awal tindak balas, primer (No. 1) dilampirkan pada RNA HCV dan satu salinan molekul sasaran, cDNA, disintesis dengan menggunakan enzim (transkripasi terbalik). Transkripase terbalik, yang juga mempunyai aktiviti RNase-H, memusnahkan RNA virus dalam RNA-cDNA hibrid. Seterusnya, primer kedua dilampirkan pada molekul cDNA, diikuti oleh penyempurnaan DNA double-stranded menggunakan transkripase terbalik. Dengan bantuan polimerase β-RNA yang lain, RNA ditranskripsikan dari cDNA, yang membawa kepada pembentukan 100 hingga 1000 naskhah amplicon RNA HCV dalam satu kitaran reaksi. Primer No. 2 dilampirkan pada aplikasi RNA ini dengan sintesis selanjutnya salinan cDNA dan pemusnahan molekul RNA. Melampirkan primer No. 1 ke cDNA diikuti dengan penyempurnaan DNA double-stranded mencetuskan kitaran penguatan seterusnya. Merekodkan hasil tindak balas dilakukan pada lumenometer, kerana amplicon RNA yang dihasilkan secara khusus berinteraksi dengan probe DNA yang dilabelkan dengan chemilumines.

    Sebagai kelebihan kaedah TMA dalam mengesan RNA HCV, ia diperhatikan:

  • menjalankan tindak balas pada suhu yang lebih rendah berbanding dengan PCR;
  • pembentukan lebih banyak amplicons dalam satu kitaran tindak balas, yang mengurangkan masa yang diperlukan untuk mendapatkan hasil akhir (30-40 minit) dan meningkatkan kepekaan tindak balas (50 salinan / ml) [45].
  • mengurangkan risiko pencemaran, kerana RNA kurang stabil daripada DNA.

    Kajian komparatif mengenai pengesanan RNA HCV menggunakan TMA dan kaedah lain telah membuktikan kebetulan keputusan yang tinggi [45].

    Gabungan prinsip-prinsip hibridisasi dan amplifikasi mendasari kaedah mengesan RNA HCV, yang ditetapkan sebagai "Kaedah hibridisasi menggunakan proba bercabang atau ujian DNA Branded (bDNA) [46]. Tidak seperti PCR, ujian ini menguatkan bukan molekul cDNA HCV, tetapi isyarat. Reaksi dilakukan di 96 plat lempung di mana serpihan RNA HCV dari 5 'zalim yang tidak diterjemahkan dan gen teras RNA HCV terserap, disebabkan oleh pengikatan selanjutnya pada molekul DNA bercabang sintetik dan hibridisasi dengan sampel yang dilabelkan dengan phosphotase alkali dengan peningkatan yang mendadak dalam isyarat yang diterima dicapai dengan penguat dan tindak balas enzimatik. Pada masa ini, diagnostik generasi ketiga telah muncul di pasaran diagnostik (Vaueg 3.0 Hepati-tis C Virus RNA), yang mempunyai sensitiviti untuk mengesan 520 IU / ml (2500 salinan HCV RNA).

    DETEKSI QUANTITATIF RNA HCV. Untuk menilai kepekatan HCV RNA yang digunakan versi kuantitatif PCR. Pada mulanya, kepekatan HCV RNA dicirikan oleh nilai-nilai ordinal, seperti "+", "++", dan lain-lain, secara visual mencerminkan intensiti band yang diperolehi oleh elektroforesis produk amplifikasi, atau melalui kaedah pencairan akhir, iaitu dengan adanya keputusan positif pada akhir titik titrasi. Kesulitan penyeragaman semua peringkat PCR tidak membenarkan penilaian objektif kepekatan RNA HCV, yang membawa kepada kesilapan besar dalam tafsiran hasil yang diperolehi.

    Pada masa ini, hasil kajian dinyatakan dalam unit kuantitatif: bilangan salinan RNA HCV yang terkandung dalam 1 ml., Dalam istilah mutlak atau logaritika (log 10). Berdasarkan fakta bahawa kepekatan RNA HCV yang dikesan mencerminkan bilangan zarah virus, penunjuk ini dirujuk sebagai "bersamaan viral (eq)", dengan penambahan awalan k (kilogram, seribu) atau M (juta). Satu lagi cara untuk menyatakan jumlah zarah virus ialah berat badan mereka yang setara. Sebagai contoh, dalam gram atau picograms (1 pg sepadan dengan kira-kira 1 juta ek). Pelbagai nilai yang digunakan menjadikannya sukar untuk mentafsirkan hasil yang diperolehi dalam pelbagai makmal. Oleh itu, Jawatankuasa Pakar WHO mengenai Standardisasi Biologi telah menghasilkan "contoh standard antarabangsa" yang mengandungi RNA HCV (membekukan serum kering yang mengandungi RNA HCV genotip 1), kepekatan yang dinyatakan dalam unit antarabangsa (IU / mL) [47]. Koefisien khas membolehkan anda mengira semula penunjuk kepekatan yang diperolehi dalam unit antarabangsa

    Hampir semua varian PCR digunakan untuk menentukan kepekatan RNA HCV. Dalam kes ini, beberapa keperluan khusus dikenakan ke atas persediaan diagnostik, yang paling penting adalah garis lurus yang ketara hasilnya, iaitu peningkatan dalam isyarat tindak balas yang direkodkan dengan peningkatan kepekatan RNA HCV dalam sampel di bawah kajian. Penggunaan piawaian dalaman dengan tahap RNA HCV yang berbeza membolehkan kami untuk mengelakkan banyak kesalahan metodologi yang mungkin menjejaskan hasil akhir tindak balas [28]. Kepekaan diagnostik yang digunakan (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA Quantitative Assay) memungkinkan untuk mengesan RNA HCV bermula pada 50 naskah per ml [48.49], yang amat penting untuk meramalkan keberkesanan terapi antiviral yang dipilih.

    PCR masa nyata (RT "RT masa nyata") adalah salah satu pilihan yang paling menjanjikan untuk kaedah kuantitatif untuk mengesan RNA HCV. Kaedah dan perkakasannya dikembangkan secara bersama oleh pakar dari Roche dan Percin Elmer. Prinsip kaedah ini adalah keupayaan untuk menghidrolisis urutan cDNA ke arah 5 '---- 3'. Reaksi ini menggunakan probe khas yang dilabelkan dengan dua pewarna fluoresen yang mempunyai penyerapan yang sama dan maksimum fluoresen. Dengan kehadiran produk penguatan, polimerase Tag membersihkan siasatan, yang menghalang pemindahan tenaga dari satu molekul pewarna ke yang lain, dan dengan itu menghalang pembebasan kuantum cahaya. Satu instrumen khas mencatatkan reaksi dan pemodelan matematik kinetik pendarfluor pada setiap peringkat tindak balas, yang membolehkan mendapatkan maklumat mengenai kepekatan awal RNA HCV.

    Ciri khas "PCR masa nyata" adalah keupayaan untuk mendapatkan maklumat mengenai kehadiran RNA HCV secara langsung dalam proses tindak balas, yang membolehkan untuk mengurangkan masa analisis dalam kombinasi dengan kepekaan tinggi dan lineariti hasil [50]. Menurut Tatyana Yashina dan penulis bersama, kaedah ini dapat mengesan 200 salinan RNA HCV per ml. [51].

    KAEDAH GENOTYPING RNA HCV. Takrif HCV yang dipunyai oleh genotip dan subtipe tertentu telah digunakan untuk menyelesaikan bukan sahaja semata-mata saintifik, tetapi juga isu-isu praktikal. Sebagai contoh: mencari sumber jangkitan semasa wabak hepatitis C atau meramalkan keberkesanan terapi yang digunakan.

    "Standard emas" genotyping HCV adalah penentuan langsung struktur utama RNA HCV dengan analisis phylogenetic seterusnya [52], yang memungkinkan untuk jelas menggambarkan virus ini mengasingkan. Maklumat ini boleh didapati dengan menggunakan pilihan penjujukan berikut:

  • langsung;
  • berdasarkan kloning standard;
  • penjujukan produk reaksi PCR (sekatan terhad).
    Walaupun ketepatan keputusannya, kaedah penjujukan langsung tidak digunakan dalam penjagaan kesihatan praktikal kerana kesukaran teknikal kajian dan kos kerja yang tinggi. Walau bagaimanapun, ketersediaan maklumat mengenai struktur utama RNA HCV adalah kaedah rujukan untuk genotyping, dan ketersediaan instrumen untuk urutan seragam memudahkan keputusan.

    Pada masa ini, dalam kebanyakan kes, kaedah berdasarkan penggunaan PCR dengan primer jenis khusus digunakan untuk genotip RNA HCV. Buat pertama kali, genotype RNA HCV dilakukan oleh N. Okamoto dan penulis bersama pada tahun 1992 menggunakan RT-PCR [53], yang termasuk dua langkah penguatan. Yang pertama dilakukan dengan universal, untuk semua genotype HCV, primer, yang kedua dengan campuran primers khusus jenis dengan mendapatkan produk penguatan spesifik dari pelbagai panjang. Kehadiran genotip tertentu dihakimi oleh saiz produk yang diperkuatkan. Sebagai primer, probe jenis khusus digunakan, maklumat mengenai yang terletak di wilayah 5'UTR, Teras atau NS5 - RNVGS [54].

    Hibridisasi produk yang diperkuatkan dengan probe khusus gen terserap (dari zon HCV RNA yang tidak diterjemahkan) yang diangkat pada membran nitrocellulose yang mendasari ujian "INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS" [55]. Pada mulanya, menggunakan ujian ini, adalah mungkin untuk mengetik genotip: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 dan 5a. Pada masa akan datang, sistem ujian generasi ke-2 "INNO-LiPA HCV II, INNOGENETICS" membolehkan kita membezakan semua 6 genotip dan tambahan 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a dan 10a. [56]

    Arsenal metodologi untuk menentukan genotip HCV tidak terhad kepada kaedah di atas dan termasuk pelbagai kaedah:

  • genotip berdasarkan analisis profil sekatan produk yang diperkuatkan (RFLP). Produk-produk amplifikasi serpihan RNA HCV (5'UTR - rantau RR HCV atau rantau NS5) dipecahkan oleh enzim sekatan. Serpihan yang dihasilkan berbeza panjang bergantung pada tapak sekatan di dalamnya, yang dipotong. Keputusan elektroforesis dan perbandingan mereka membolehkan kita mengenal pasti genotip HCV dalam sampel yang di bawah kajian [57]. Perbandingan hasil genotip oleh PCR-RFLP dengan penjujukan data menunjukkan kebetulan keputusan yang tinggi - 95% [58].
  • genotip berdasarkan kaedah SSCP (penilaian polimorfisme konformasi serpihan DNA terkandas). Kawasan 5'-diterjemahkan RNA HCV, yang mempunyai set minimum variasi nukleotida yang membezakan genotip antara satu sama lain, dipilih sebagai objek kajian. Fakta ini menentukan kemungkinan menggunakan primer biasa semasa genotyping [59].

    SEROTYPING Anti-HCV dimungkinkan oleh kajian oleh P.Simmonds dan pengarang bersama yang menubuhkan kehadiran antibodi yang diarahkan kepada epitope khusus genotip, maklumat tentang mana yang dikodkan oleh rantau HCV RNK [60]. Dengan bantuan diagnostik untuk ELISA, dibina berdasarkan peptida sintetik, adalah mungkin untuk membezakan antara kes-kes hepatitis C yang disebabkan oleh virus 1, 2 dan 3 genotype (89% perlawanan dengan hasil genotip). Perkembangan sistem ujian menggunakan antigen sintetik dan rekombinan yang dikodkan oleh NS4 dan Zon Teras RNA HCV membolehkan kami memperluaskan senarai jenis varian virus, serta menilai kehadiran subtipe (1a, lb, 2a, 2b, 3a, 4a) [61,62]. Pada masa ini, pengeluaran produk diagnostik komersial untuk serotyping dijalankan dalam versi spot ELISA - "Murekh NA 1-6 Serotyping Assay, Murex Diagnostics", dan dalam varian "immunoblot" - RIBA HCV Serotyping Assay, Chiron Diagnostics. Data perbandingan hasil serotyping dan genotyping RNA HCV menunjukkan tahap kebetulan yang tinggi, mencapai 95% [62].

    Serotyping anti-HCV berbanding dengan genotyping RNA HCV mempunyai kelebihan seperti kemudahan reaksi dan kos yang lebih rendah. Pada masa yang sama, kaedah ini tidak boleh menggantikan genotyping. Hasil serotyping anti-HCV menunjukkan jenis anti-HCV dengan jangkitan semasa atau sebelumnya. Dalam sesetengah kes (kebanyakannya pada pesakit dengan hemofilia), pengesanan serentak anti-HCV dari subtipe yang berbeza telah direkodkan, yang mungkin menunjukkan pelbagai jangkitan dengan subtipe yang berbeza dan genotip HCV [63]. Di samping itu, pada pesakit dengan hepatitis C terhadap latar belakang keadaan immunodeficiency yang jelas, RNA mungkin satu-satunya penanda, yang menjadikannya mustahil untuk melakukan serotyping.

    PENGENALAN DAN RAWATAN KEPUTUSAN UJIAN PENYAKIT PENCARIAN SERCOGIK HCV. Kehadiran pelbagai penanda serologi jangkitan HCV semasa atau sebelum ini, serta asas metodologi moden, membolehkan menyelesaikan masalah diagnosis makmal dan pencegahan hepatitis C. Jadual 2 menunjukkan penanda serologi jangkitan HCV dan bidang yang paling penting dalam ujian mereka.

    Jadual 2
    Kepentingan diagnostik penanda jangkitan semasa atau sebelumnya HCV

    Pemeriksaan
    dalam perkhidmatan
    darah

    Pengesahan
    menunggu
    hasilnya
    + anti-HCV

    Salah satu tugas utama diagnosis makmal hepatitis C adalah untuk mendiagnosis dan membezakan akut dari hepatitis C kronik dengan mengenal pasti penanda serologi jangkitan. Seperti dengan hepatitis virus akut yang lain, penanda serologi bagi jangkitan HCV secara konsisten muncul dan hilang semasa jangkitan dan proses penyembuhan (Rajah 2).

    RNA HCV boleh dikesan pada hari 7-21 selepas jangkitan dengan HCV, dan anti-HCV pada hari 20-150 (purata 50 hari) [64]. Spektrum anti-HCV mungkin berbeza-beza bergantung kepada tempoh hepatitis akut. Adalah dipercayai bahawa yang pertama dapat mengenal pasti antibodi yang dikodkan oleh zon Teras dan NS5 RNA HCV. Anti-HCV kepada protein yang dikodkan oleh zon NS4 tidak hadir dalam fasa akut hepatitis C [65]. Kajian komparatif mengenai tahap kepekatan anti-HCV, spektrum anti-HCV dan RNA HCV pada pesakit dengan hepatitis akut dan kronik menunjukkan beberapa perbezaan [66]. Pada pendapat kami, perbezaan ini mungkin dikaitkan dengan ciri-ciri individu proses berjangkit, yang mengurangkan nilai diagnostik mereka.

    Rajah. 2. Hepatitis C akut

    Dengan analogi dengan diagnosis makmal hepatitis A dan B, diharapkan penentuan antibodi kepada IgM kelas HCV akan mempunyai nilai diagnostik sebanyak IgM anti-HAV dan IgM anti-HBc. Walau bagaimanapun, data ujian dari serum pesakit dengan hepatitis C akut dan kronik untuk kehadiran IgM anti-HCV menunjukkan bahawa mereka sering dijumpai di kalangan pesakit ini - 50-93% dan 50-70%, masing-masing [67.68]; hasil ini menunjukkan bahawa pengesanan IgM anti - HCV tidak boleh digunakan sebagai penanda jangkitan HCV akut.

    Ketiadaan penanda yang menuntut peranan "emas" piawai hepatitis C akut menentukan keperluan penilaian komprehensif mengenai hasil yang diperoleh, berdasarkan pemerhatian dinamik pesakit.

    Tidak kurang pentingnya penggunaan kaedah yang sangat sensitif untuk menguji RNA HCV - mengurangkan risiko mengembangkan hepatitis C. Pasca-transfusi keperluan untuk kerja tersebut ditentukan oleh kehadiran fasa "tetingkap", iaitu. masa antara pengesanan pertama RNA HCV dan penampilan anti-HCV, serta kewujudan penderma darah (pesakit dengan hepatitis C kronik) yang mempunyai HCV RNA tanpa ketiadaan HCV. Sistem semasa untuk memonitor darah yang disumbangkan untuk HCV hanya termasuk ujian anti-HCV, dan risiko jangkitan dengan hepatitis C tetap. Berdasarkan hal ini, persoalan menguji darah untuk kehadiran RNA HCV dengan menggunakan metode modern (metode NAT - "uji penguatan asid nukleik") adalah sah. Faktor yang membatasi kerja ini adalah kos penyelidikan yang tinggi. Untuk mengurangkan kos, disyorkan untuk menguji kolam sera darah (dari 8 hingga 96 sampel) diikuti dengan mencari sampel positif dalam kes pengesanan RNA HCV di kolam sera. Mengambil kira faktor pencairan RNA HCV yang dikehendaki apabila membiak sera darah, persoalan menggunakan kaedah pengesanan yang paling sensitif menjadi penting. Adalah dipercayai bahawa penggunaan kit diagnostik untuk NAT - dengan kepekaan 50-100 IU / mL dapat mengurangkan risiko hepatitis C. Selepas pemindahan

    Tidak syak lagi, senarai isu-isu yang boleh diselesaikan semasa menguji keseluruhan spektrum penanda jangkitan HCV tidak terhad kepada dua bidang ini. Ketersediaan kaedah ujian moden dalam kombinasi dengan pengetahuan keupayaan mereka membuka prospek yang luas untuk kerja saintifik dan diterapkan pada hepatitis C.


  • Artikel Yang Berkaitan Hepatitis