Analisis kualitatif dan kuantitatif PCR untuk hepatitis C: negatif, positif, transkrip

Share Tweet Pin it

Hepatitis C adalah penyakit hati virus yang disebabkan oleh HCV flavivirus (dari bahasa Inggeris hepatitis C virus), struktur yang mengandungi molekul asid ribonucleic (RNA). RNA membawa kod genetik virus. Kehadirannya membolehkan analisis PCR untuk hepatitis C.

Bahaya HCV untuk seseorang terletak pada hakikat bahawa tetingkap serologi yang disebut (masa antara jangkitan dan penampilan reaksi dari sistem imun) boleh agak lama - dari beberapa minggu hingga enam bulan.

Ia tidak mengesan jangkitan dan memulakan rawatan mengikut masa.

Bergantung kepada ciri-ciri individu organisma, pembawa HCV dapat nyata dalam bentuk akut, dan juga berlaku sebagai penyakit kronik yang memerlukan rawatan yang panjang dan mahal. Apabila antibodi ke HCV dikesan, satu siri ujian makmal dilakukan, termasuk PCR untuk hepatitis C. Ujian ini dilakukan kepada semua orang yang antibodi darah ke HCV telah dijumpai.

Apakah analisis PCR?

Analisis makmal PCR untuk hepatitis C - kajian bahan biologi untuk mengesan kehadiran flavavirus.

Tindak balas rantai polimerase (sebagai singkatan bermaksud) menunjukkan nilai kuantitatif lesi viral tubuh, ciri kualitatifnya, serta genotip virus yang mengandungi RNA.

Secara asasnya, serta berdasarkan analisis tambahan, kaedah dan tempoh terapi, serta faktor epidemiologi (tahap risiko penghantaran ke pembawa lain) ditentukan.

Apakah Analisis RNA Hepatitis C?

Hepatitis C PCR juga dipanggil analisis RNA (RNA HCV), kerana Flavavirus mengandungi zarah RNA dengan saiz virion 30-60 nm. Salah satu ciri mikroorganisma ini adalah kecenderungan mutasi tinggi.

Setiap subspesies (genotip) virus mempunyai rintangan yang berbeza, yang menyebabkan kaedah rawatan yang berbeza dan sifat prognosis lanjut untuk pesakit.

Bahan biologi (darah vena) diberikan pada perut kosong dan, sebagai peraturan, diuji dengan kaedah PCR Masa Nyata (diagnostik masa sebenar yang sangat sensitif dengan had pengesanan yang lebih rendah sebanyak 15 IU / ml menggunakan sistem automatik tertutup).

Terdapat ujian lain, contohnya COBAS AMPLICOR dengan kepekaan 50-100 IU / ml. Bagi mana-mana ujian makmal, ambang kepekaan adalah penting, i.e. keupayaan reagen untuk mengesan kepekatan minimum virus dalam bahan biologi.

Jenis analisis untuk hepatitis C oleh PCR

Hepatitis C PCR merangkumi tiga komponen penting:

  • analisis kualitatif;
  • analisis kuantitatif;
  • genotyping.

Ujian ini membolehkan anda menentukan sifat viremia, serta ciri genetik patogen. Bergantung pada sensitiviti sistem diagnostik, kajian ini dilakukan sekali, dan kadang-kadang ujian kedua dilakukan dengan reagen yang lebih sensitif untuk mengesahkan atau memperbaiki hasilnya.

PCR berkualiti tinggi hepatitis C

Kualitatif analisis Hepatitis C PCR adalah satu lagi nama umum untuk analisis tindak balas rantai polimerase. Kepekaan standard ujian, yang membolehkan untuk mengesan kehadiran lesi virus, berada dalam lingkungan 10-500 IU / ml.

Analisis PCR negatif untuk hepatitis C menunjukkan bahawa kepekatan virus di dalam darah pesakit adalah di bawah ambang kerentanan sistem diagnostik.

Jika PCR berkualiti tinggi memberikan jawapan "tidak dikesan", maka untuk rawatan berikutnya adalah penting untuk mengetahui ambang kepekaan reagen.

Fraksi protein untuk flavavirus muncul lebih lama.

PCR Kuantitatif Hepatitis C

Kuantitatif PCR hepatitis C adalah penunjuk viral load, yang mencerminkan tahap kepekatan RNA flavavirus dalam tubuh. Ini adalah penunjuk yang menunjukkan berapa banyak serpihan RNA virus yang terkandung setiap sentimeter padu darah. Hasil PCR hepatitis C RNA dalam ujian kuantitatif dalam sistem konvensional ditunjukkan dalam unit antarabangsa per mililiter (IU / ml) dan dapat direkam dalam berbagai cara, contohnya, 1.7 juta atau 1.700.000 IU / ml.

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C ditetapkan kepada pesakit sebelum memulakan terapi antiviral, dan pada minggu 12 rawatan, untuk menilai keputusan kaedah yang dipilih untuk berurusan dengan HCV. Beban virus membolehkan menentukan tiga petunjuk penting penyakit ini:

  • infektif, iaitu. tahap risiko penghantaran virus dari satu pembawa ke yang lain (semakin tinggi kepekatan RNA flavavirus, semakin tinggi kebarangkalian menjangkiti orang lain, misalnya, melalui hubungan seksual);
  • kaedah dan keberkesanan rawatan;
  • tempoh dan prognosis terapi antiviral (semakin tinggi beban virus, semakin lama rawatan berlangsung).

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C bergantung kepada jenis ujian makmal dan ambang kepekaannya. Batasan yang lebih rendah dari norma dianggap sebagai penunjuk hingga 600.000 IU / ml, nilai rata-rata berada dalam kisaran 600.000-700.000 IU / ml. Keputusan 800.000 IU / ml dan ke atas dianggap sebagai paras tertinggi virus yang mengandung RNA.

Genotyping

Oleh kerana aktiviti mutasi HCV yang tinggi, semasa ujian, adalah penting untuk mengenal pasti genotip virus yang ada di dalam darah pesakit. Secara keseluruhan, 11 genotip virus hepatitis C telah direkodkan di planet ini, termasuk banyak subspesies (subtipe). Di wilayah Persekutuan Rusia mengagihkan 1,2 dan 3.

RNA PCR Hepatitis C bersama-sama dengan genotip adalah komponen penting dalam analisis, kerana membolehkan doktor menentukan rintangan (rintangan) virus itu, memilih ubat-ubatan yang sesuai dan menetapkan kursus rawatan.

Genotyping juga membolehkan anda secara tidak langsung menentukan keadaan hati. Sebagai contoh, 3 genotip HCV sering diiringi oleh steatosis, di mana lemak terkumpul di dalam sel-sel organ.

Ujian darah untuk PCR untuk hepatitis C harus menghasilkan angka yang menentukan genotip tersebut. Tanggapan makmal boleh mengatakan "tidak ditaip" - dan ini bermakna bahawa virus adalah dalam darah manusia yang tidak dikesan oleh sistem ujian. Ini mungkin menunjukkan bahawa genotip itu tidak tipikal untuk kawasan geografi yang diberikan. Dalam kes ini, anda perlu mengulangi analisis dengan kepekaan yang tinggi terhadap sistem diagnostik.

Pengkodan analisis PCR untuk hepatitis C

Ujian untuk dekripsi kuantitatif hepatitis C PCR boleh berdasarkan pada data di atas. Apabila memperoleh keputusan ujian makmal, data berikut biasanya ditulis:

  • "Found" / "tidak dijumpai" (PCR berkualiti tinggi untuk hepatitis C);
  • bilangan pecahan yang mengandungi RNA, contohnya 831.680 ME / ml (analisis PCR kuantitatif);
  • angka yang menentukan genotip HCV, sebagai contoh - 1, 2, 3, 4;
  • Nama ujian paling kerap adalah Real-time.

Yang paling penting dalam menafsirkan analisis PCR untuk hepatitis C adalah perenggan kedua, yang menunjukkan beban virus, yang menentukan prognosis, kaedah dan tempoh rawatan.

Sekiranya ujian PCR untuk hepatitis C adalah negatif, dan ELISA adalah positif - apakah maksudnya?

Untuk menguraikan ujian makmal, adalah penting untuk menghubungi pakar hepatologi atau pakar penyakit berjangkit yang akan menerangkan maklumat yang diperolehi mengikut jenis sistem diagnostik dan kepekaan ambangnya. Dalam amalan perubatan, terdapat banyak data ujian darah yang boleh mengelirukan seseorang tanpa pendidikan perubatan.

Sebagai contoh, jika ujian untuk hepatitis C PCR adalah negatif, dan ELISA adalah positif, ini mungkin bermakna tiada HCV dalam darah pesakit pada masa ini, tetapi sebelum ini ia mengalami bentuk akut hepatitis C. Adalah dipercayai bahawa ujian imunosorben berkaitan enzim positif (ELISA) menunjukkan bahawa terdapat antibodi dalam darah yang telah dihasilkan selepas pencerobohan virus pada masa lalu. Tetapi dalam amalan perubatan moden, analisis ELISA dianggap tidak dapat dipercayai dan sering memberikan hasil tidak tepat, jadi doktor menggunakannya sebagai pemeriksaan utama. Apabila mendiagnosis penyakit, pakar dipandu dengan tepat oleh ujian PCR.

Video berguna

Video berikut memberikan penerangan yang sangat terperinci dan menarik mengenai intipati kaedah PCR, bagaimana analisis dilakukan:

Kesimpulannya

Untuk analisis PCR untuk hepatitis C, darah vena biasanya diambil. Selalunya terdapat pengambilan bahan biologi berganda - untuk ELISA, dan secara langsung untuk ujian PCR. Untuk keputusan ujian yang betul, pematuhan dengan peraturan asas untuk pensampelan makmal bahan biologi diperlukan:

  • darah untuk analisis diberikan pada separuh pertama hari perut kosong;
  • antara makanan dan pensampelan darah perlu mengambil masa sekurang-kurangnya 8 jam;
  • alkohol dan makanan goreng juga harus dikecualikan sebelum mengambil ujian;
  • pada siang hari sebelum menderma darah, adalah perlu untuk mengelakkan penuaan fizikal yang tinggi.

Keputusan ujian darah biasanya siap pada keesokan harinya.

Diagnosis Virus Hepatitis C

Virus Hepatitis C (HCV) adalah virus yang mengandungi RNA dari keluarga Flaviviridae. Jangkitan ini mampu mengalikan sel darah (monosit, neutrofil, limfosit B dan makrofaj), dan juga menjejaskan sel-sel hati itu sendiri - hepatosit. Oleh kerana tahap aktiviti mutasi yang tinggi, jenis hepatitis ini dapat mengelakkan pendedahan kepada sistem imun manusia.

Terdapat 11 genotip dan jisim subtipe virus sedemikian, yang berbeza dengan tahap kerosakan hati dan mempengaruhi tempoh rawatan hepatitis. Pelbagai hepatitis C memerlukan pelbagai kaedah terapi antiviral. Sebagai contoh, hepatitis 1 dan 4 genotip perlu dirawat selama 48 minggu, dan untuk kursus terapi terhadap virus jenis ke-2 dan ke-3, ia mungkin mengambil masa hanya 24 minggu.

Selepas ujian cepat untuk hepatitis C memberikan hasil yang positif, analisis PCR dilakukan untuk mengesan RNA virus dalam sampel darah.

Diagnostik PCR

Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah teknik eksperimen untuk mengesan virus. Analisis seperti hepatitis C boleh meningkatkan ketumpatan beberapa serpihan DNA atau RNA virus dalam sampel yang dipindahkan. Ini membolehkan mereka mengenali dan mengira nombor tersebut.

Ujian hepatitis C ini dilakukan mengikut prosedur berikut:

  1. Contoh darah (bahan genetik) yang mungkin mengandungi gen hepatitis yang diingini dimasukkan ke dalam tiub ujian. Bahan khas, primer, diletakkan di atasnya, mereka adalah segmen panjang pendek dari gen yang dikehendaki, yang disintesis secara kimia. Polimerase DNA atau RNA juga ditambah kepada kapal ini, ia mampu membina rantai asid nukleik yang sama sekali sama dengan yang asal. Pemilihan nukleotida bebas, yang merupakan bahan binaan khusus untuk DNA dan RNA, ditambah kepada komposisi yang diperoleh, dan salah satunya mengandungi zarah kecil fosforus radioaktif.
  2. Campuran yang dihasilkan pada mulanya dipanaskan hingga 95 darjah, akibatnya kedua-dua helai DNA yang saling berkait dalam keadaan normal tidak dimansuhkan.
  3. Untuk meneruskan analisis, ubat disejukkan, di mana titik utama melekat pada seksyen yang dikehendaki dari genom virus hepatitis, menghalang DNA daripada menjadi heliks ganda. Apabila campuran sejuk, polimerase mencari rantaian tunggal nukleotida. Semasa lampiran enzim ini, ia meluncur di sepanjang rantaian DNA (sebagai blok sepanjang tali), dan pada helix dua kali ganda ia tidak dapat "bekerja", untuk tujuan ini campuran dipanaskan.
  4. Untuk memanjangkan analisis, pemanasan semula dilakukan, yang sekali lagi membawa kepada pemisahan rantai nukleotida. Apabila kitaran PCR sedemikian dilakukan dalam sampel, jumlah gen hepatitis yang dikehendaki meningkat dalam bahagian geometri, dan bahan-bahan genetik lain yang dihasilkan dihasilkan hanya dalam corak linear.
  5. Untuk menyelesaikan kajian, penyelesaian itu dibersihkan daripada zarah nukleotida sisa. Mereka dipisahkan oleh elektroforesis, dengan pemisahan oleh parameter berat molekul rangkaian DNA. Ujian seperti ini untuk hepatitis C menggunakan PCR membolehkan anda menentukan sama ada gen virus yang dikehendaki hadir dalam sampel atau tidak.

Kelebihan ujian ini adalah ambang sangat tindak balas PCR. Teknik seperti diagnosis, idealnya diperlukan hanya satu genom virus untuk keseluruhan sampel.

Di samping itu, PCR ini adalah benar-benar khusus. Dalam setiap gen ada urutan unik nukleotida, yang, seperti sidik jari, tidak boleh diulang di mana-mana sahaja. Untuk analisis ini pada hepatitis C, primer disintesis supaya mereka benar-benar sesuai dengan kawasan unik gen yang dicari, yang tidak mempunyai urutan lain.

Teknik ini juga membolehkan anda menganalisis untuk hepatitis C dan menentukannya, membantu menentukan diagnosis akhir.

Analisis makmal sedemikian memberikan maklumat lebih daripada hanya kehadiran atau ketiadaan RNA virus hepatitis C atau jenis lain dalam sampel darah. Menentukan parameter radiasi radioaktif, adalah mungkin untuk mengenalpasti berapa banyak bahan genetik yang diingini pada asalnya dalam sampel yang di bawah kajian. Ini membolehkan anda menentukan parameter apa yang dipanggil viral load - kepekatan zarah RNA hepatitis dalam jumlah tertentu.

Analisis kualitatif PCR

Analisis ini membolehkan untuk menentukan kehadiran virus hepatitis B dalam sampel darah. Ia harus dilakukan untuk semua orang yang telah menemui antibodi untuk hepatitis.

Sebagai hasil penyelidikan sedemikian, hanya terdapat dua nilai:

  • "Dikesan." Hasil pemeriksaan positif sedemikian ditafsirkan sebagai berikut: dalam sampel dianalisis dari serpihan bahan biologi RNA virus hepatitis telah dijumpai. Ini adalah dari ini bahawa terdapat fakta bahawa pesakit telah dijangkiti virus ini. Ini mungkin menunjukkan bahawa hepatitis patogen melipatgandakan dalam badan dan menjangkiti sel baru, memusnahkan hati.
  • "Tidak dikesan." Keputusan ini mengatakan bahawa dalam sampel yang dianalisis di makmal ini, tiada serpihan RNA yang khusus untuk virus hepatitis C yang dikesan.. Dalam kes sedemikian, dikatakan bahawa tahap kepekatan berada di bawah ambang kepekaan ujian.

Ujian semacam itu juga mungkin palsu-positif atau palsu-negatif, kerana pencemaran biomaterial atau kehadiran dalam sampel bahan tertentu yang bertindak balas dengan komponen kimia yang diperlukan untuk analisis.

Perlu ditekankan bahawa dalam fasa akut hepatitis C, kajian kualitatif yang menggunakan kaedah PCR dapat mengesan RNAnya selepas 1-2 minggu dari masa infeksi organisma. Ini bermakna bahawa penyakit ini dapat dikesan jauh sebelum penampilan gejala luarannya atau rupa antibodi kepada hepatitis dalam tubuh.

Pensampelan darah (dari urat) disukai dilakukan pada perut kosong.

Analisis Kuantitatif PCR

Menggunakan analisis ini, tentukan tahap kepekatan virus hepatitis dalam pesakit (viral load). Ujian semacam itu mesti dihantar untuk menganggarkan jumlah virus RNA per unit isipadu tertentu.

Ujian penguraian untuk hepatitis C, dilakukan mengikut kaedah ini, boleh mempunyai hasil berikut:

  • Penunjuk kuantitatif (dalam angka)

Kepekatan virus (jumlah) diberikan dalam segi angka. Untuk ini, unit pengukuran yang berlainan digunakan: sama ada IU / ml (unit antarabangsa per mililiter) atau salinan / ml (bilangan salinan virus RNA per mililiter). Secara purata, 1 IU / ml sepadan dengan 4 salinan / ml, kerana sistem ujian yang berbeza mempunyai faktor penukaran yang berbeza untuk unit tersebut.

Nilai rendah viral load dianggap kurang daripada 400,000 IU / ml, dan 8,000,000 IU / ml adalah tinggi.

Penilaian kuantitatif sedemikian membolehkan untuk menentukan tahap penyakit menular ("infeksi") pesakit. Semakin penunjuk analisis ini, semakin tinggi kebarangkalian risiko penularan patogen kepada orang lain (melalui hubungan seksual atau menegak).

Keputusan ini bermaksud bahawa kaedah kuantitatif tidak dapat mengesan Hepatitis RNA, tetapi virus itu sendiri ada di dalam tubuh, hanya dalam kepekatan yang sangat rendah. Ini telah disahkan oleh analisis kualitatif tambahan PCR, dan oleh hasil positifnya ia memberi kesaksian kepada fakta kehadiran hepatitis.

  • Keputusan tidak dikesan

    Tafsiran positif analisis ini menunjukkan bahawa ujian kuantitatif itu sendiri dalam sampel darah tidak dapat mengesan zarah RNA tertentu virus hepatitis C.

  • Analisis kuantitatif PCR yang dijalankan pada tempoh yang berlainan terapi antiviral (1, 4, 12 dan 24 minggu) membolehkan kita untuk menilai keberkesanan rawatan dan membuat pindaan yang perlu.

    Spesifikasi analisis

    Ujian ini mesti diluluskan untuk menentukan genotip yang berbeza daripada hepatitis C. Pada masa ini, terdapat 11 genotip patogen ini dan banyak subtipe. Di negara kita, genotip hepatitis C spesies 1, 2 dan 3 adalah perkara biasa. Dalam makmal, mereka dapat mengenal pasti pelbagai subtipe spesies ini: genus jenis 1a, 1b, 2a, 2b, atau 3, 4, 5, 6 dengan pelbagai modifikasi subtipe. Untuk kesemua hepatitis ini, kekhususan penentuan adalah 100%.

    Menentukan pengubahsuaian genotip menjadikan kemungkinan untuk memilih rawatan yang sesuai. Kehadiran jenis genotip tertentu dalam pesakit tidak menunjukkan bahawa penyakit itu lebih mudah atau lebih rumit, mereka hanya jenis virus hepatitis, dan tidak lebih.

    Dalam kes-kes tersebut apabila genotip virus tidak dapat diasingkan di makmal, hasilnya boleh diberikan: "Tidak ditetik. Telah menyiasat genotip: seperti-dan-seperti "(sebagai contoh, 1a, 2c, 3av). Penyahkodan ini menunjukkan bahawa dalam makmal ini tidak terdapat reagen yang sesuai yang dapat menentukan genotip virus hepatitis. Kajian ini telah diuji untuk virus, data dalam senarai, tetapi kesesuaian mereka dengan sampel RNA tidak dikenalpasti.

    Untuk membuat diagnosis akhir, hanya satu jenis analisis tidak mencukupi. Setiap ujian boleh memberikan hasil positif palsu. Untuk mengenal pasti jenis hepatitis dan sejauh mana kerosakan pada jangkitan badan ini, lakukan kajian komprehensif. Ini dilakukan biopsi hati dan menguji enzimnya: ALT, ASAT, serta fosfatase alkali dan LDH. Ujian bilirubin dan analisa indeks prothrombin juga boleh dilakukan.

    Hanya satu set ujian dan ujian makmal seperti itu, dengan analisis umum keadaan pesakit, akan membantu menentukan kehadiran hepatitis dalam tubuh, bentuknya, serta keparahannya. Atas dasarnya, doktor dapat menentukan rawatan lanjut dan membuat kemungkinan prognosis untuk pesakit.

    HCV, RNA mengkuantifikasi [PCR masa nyata]

    Satu kajian untuk mengenal pasti agen penyebab hepatitis C (HCV), di mana kehadiran bahan genetik (RNA) virus dan kuantiti (viral load) dalam sampel darah ditentukan menggunakan kaedah tindak balas rantai polimer masa sebenar (RT-PCR).

    RNA HCV boleh dikesan pada kepekatan yang berada di luar batas bawah kepekatan linear. Jangkauan kepekatan linear adalah julat di mana anda boleh mengira dengan tepat bilangan salinan patogen. Untuk analisis ini, julat linear kepekatan DNA HCV ditentukan oleh pengesan pengesan ialah 7.5 × 10 2 - 1.0 × 10 8 salinan / ml sampel.

    Sinonim Rusia

    Virus Hepatitis C (HCV), penentuan kuantitatif RNA.

    Sinonim bahasa Inggeris

    Hepatitis C Virus RNA, Kuantitatif, Masa Nyata PCR, Darah, Beban Viral HCV, RNA Virus Hepatitis C.

    Kaedah penyelidikan

    Tindak balas rantaian transkrip polimerase sebaliknya.

    Apa bahan biologi yang boleh digunakan untuk penyelidikan?

    Bagaimana untuk mempersiapkan kajian?

    Jangan merokok selama 30 minit sebelum menderma darah.

    Maklumat am mengenai kajian ini

    Hepatitis C virus (HCV) adalah virus RNA dari keluarga Flaviviridae yang menjangkiti hati. Ia dapat melipatgandakan sel darah (neutrofil, monosit dan makrofag, limfosit B) dan menyebabkan cryoglobulinemia, penyakit Sjogren dan penyakit limfoproliferatif sel B. HCV, disebabkan oleh aktiviti mutasi yang tinggi, dapat mengelakkan pendedahan kepada mekanisme perlindungan sistem kekebalan tubuh. Terdapat 6 genotip dan banyak subtipe virus, yang mempunyai makna yang berbeza untuk meramalkan perkembangan penyakit dan keberkesanan terapi antiviral.

    Cara utama penularan adalah melalui darah (ubat untuk darah dan transfusi plasma, organ donor, jarum suntikan tidak steril, jarum, alat untuk tatu, menindik). Jangkitan melalui hubungan seksual dan bayi dari ibu semasa bersalin mungkin, tetapi ini jarang terjadi.

    Hepatitis virus akut biasanya dicirikan oleh kursus asymptomatic dan masih tidak dapat dikesan dalam kebanyakan kes. Hanya dalam 15% orang yang dijangkiti penyakit ini akut, dengan rasa mual, sakit badan, kurang selera makan dan kehilangan berat badan (jarang disertai dengan penyakit kuning). 60-85% orang yang dijangkiti mengalami jangkitan kronik, iaitu 15 kali lebih tinggi daripada kekerapan jangkitan kronik dalam hepatitis B. Hepatitis C virus kronik berlaku dengan peningkatan enzim hepatik dan tanda-tanda gejala buruk. Dalam 20-30% pesakit, penyakit ini membawa kepada sirosis hati, meningkatkan risiko kegagalan hati dan karsinoma hepatoselular.

    Pengesanan RNA HCV menunjukkan pendaraban virus dalam badan dan merupakan kaedah untuk mendiagnosis penyakit. Bahan genetik virus dapat dikesan oleh PCR 10-12 hari selepas jangkitan - dalam tempoh ini, antibodi spesifik, yang terbentuk beberapa bulan selepas jangkitan, tidak hadir dan petunjuk biokimia fungsi hati berada dalam nilai rujukan.

    Melalui PCR, RNA virus dikesan sama ada secara kualitatif atau kuantitatif. Oleh kerana kaedah kualitatif, kehadiran virus hepatitis C dan pembiakan aktifnya disahkan. Penentuan kuantitatif beban virus berkenaan dengan genotip HCV membolehkan anda memantau terapi berterusan dan meramalkan perjalanan penyakit.

    Keberkesanan rawatan dinilai oleh jumlah RNA sebelum dan semasa terapi. Biasanya, viral load darah berkurangan beberapa kali dalam tiga bulan pertama rawatan yang berjaya. Dengan terapi yang berkesan, viremia dikurangkan dengan dua pesanan magnitud dalam rawatan 4-12 minggu pertama dan selepas tamat kursus terapi, bahan genetik virus tidak dikesan dalam darah. Ketiadaan penurunan dalam viremia selepas 12 minggu dari permulaan rawatan menunjukkan ketidakmampuannya. Adalah disyorkan untuk melakukan analisis sebelum permulaan terapi, pada minggu ke-4, ke-12 dan ke-24 rawatan dan 24 minggu selepas tamat kursus. Tempoh terapi dan kekerapan kuantifikasi RNA virus Hepatitis C bergantung kepada genotip virus dan tahap kerosakan hati.

    Apakah penyelidikan yang digunakan?

    • Untuk mengesahkan diagnosis "hepatitis C virus".
    • Untuk meramalkan perjalanan hepatitis C. virus
    • Untuk memantau terapi antiviral dan menentukan taktik rawatan lanjut.

    Bilakah kajian itu dijadualkan?

    • Dengan pengesanan kualitatif RNA hepatitis C.
    • Dalam hepatitis C. virus akut dan kronik
    • Apabila hepatitis bercampur.
    • Apabila merancang, semasa dan selepas berakhirnya terapi antiviral.

    Apakah hasilnya?

    • Tidak dikesan - tiada RNA virus hepatitis C yang dikesan atau nilai di bawah batas kepekaan kaedah (200 salinan / ml = 400 IU / ml).
    • salinan / ml (IU / ml) - RNA virus Hepatitis C dikesan. Viremia rendah (prognosis penyakit yang paling baik dan keberkesanan terapi).
    • > 2 * 10 ^ 6 salinan / ml (> 4 * 10 ^ 6 IU / ml) - RNA virus Hepatitis C dikesan. Viremia tinggi.
    • > 1.0 * 10 ^ 8 salinan / ml (> 2 * 10 ^ 8 IU / ml) - RNA virus Hepatitis C dikesan pada kepekatan di atas julat kepekatan linear.

    Rangkaian linear kepekatan RNA virus hepatitis C, yang ditentukan oleh pengesan pengesan, adalah 7.5 * 10 ^ 2 - 1.0 * 10 ^ 8 salinan / ml (1.5 * 10 ^ 3 - 2 * 10 ^ 8 IU / ml).

    Apa yang boleh mempengaruhi hasilnya?

    Hasil yang tidak dapat dipercayai boleh didapati dengan:

    • pencemaran biomaterial;
    • kehadiran dalam sampel perencat - bahan kimia dan protein yang mempengaruhi pelbagai komponen PCR;
    • kehadiran heparin dalam darah.

    Nota penting

    • Tahap beban darah virus tidak menunjukkan tahap kerosakan pada hati dan keparahan penyakit. Untuk penilaian mereka, perlu untuk menyiasat parameter biokimia dan bahan biopsi.
    • Apabila merancang rawatan, sangat penting untuk menentukan genotip virus hepatitis C.

    Disyorkan juga

    Siapa yang membuat kajian itu?

    Sastera

    • Zh.I. Vozianova Penyakit berjangkit dan parasit: Dalam 3 tan - K.: Kesihatan, 2000. - Jilid 1: 600-690.
    • Kiskun A.A. Kajian imunologi dan serologi dalam amalan klinikal. - M.: OOO MIA, 2006. - 471-476 ms.
    • Prinsip Perubatan Dalaman Harrison. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
    • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, dan lain-lain. Dalam sel vivo virus hepatitis C, terdapat pengaruh viral load, genotype virus, dan fenotip sel. Darah. 1998 Mei 15; 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
    • Revie D, Salahuddin SZ. Jenis sel manusia untuk replikasi virus hepatitis C dalam vivo dan vivo: pernyataan lama dan bukti semasa. Virol J. 2011 11 Jul; 8: 346. doi: 10.1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

    Kajian PCR untuk hepatitis C: jenis, tanda, transkrip

    Hepatitis C virus adalah penyakit serius yang berlaku dengan kerosakan kepada hati. Dalam lapan puluh peratus pesakit, ia menjadi kronik. Virus ini mengalar di sel hati - hepatosit - dan menyebabkan kematian mereka. Tisu yang mati digantikan dengan tiub tisu penghubung, fibrosis berkembang.

    Apabila fibrosis berkembang, hati tidak dapat melaksanakan fungsinya, sirosis hati bermula, yang berbahaya kerana komplikasinya: peningkatan tekanan dalam sistem vena portal, pendarahan gastrousus, pembekuan darah terjejas, perubahan mental akibat kerosakan pada inti otak.

    Penyebab penyakit itu adalah jangkitan oleh virus dari keluarga Flaviviridae, yang tergolong dalam jenis virus RNA. Ini bermakna bahawa bahan genetik yang mana protein patogen disintesis dikodkan dalam molekul asid ribonucleik. Jangkitan berlaku melalui darah, secara seksual, dan dari wanita hamil kepada janin. Malangnya, jumlah masa yang mencukupi dapat berlalu antara jangkitan dan permulaan pengeluaran antibodi - dari dua minggu hingga enam bulan. Ini tidak membenarkan menentukan jangkitan dengan kaedah immunoassay dan memulakan rawatan pada peringkat awal.

    Apakah analisis PCR?

    PCR adalah kaedah analisis molekul, yang membolehkan untuk mengesan bahan genetik patogen yang sudah ada pada minggu pertama selepas jangkitan menggunakan tindak balas rantai polimerase. Kajian ini mempunyai kekhususan tinggi, ketepatan, dan membolehkan bukan sahaja untuk menentukan kehadiran atau ketiadaan virus, tetapi juga kepekatan dan genotipnya.

    Untuk kajian ini, darah pesakit diambil di mana RNA virus berpotensi terletak. Primer ditambahkan ke darah - sintesis sintetik dari gen yang dikehendaki dari panjang yang kecil, dan polimerase RNA adalah enzim khas yang berulang kali meningkatkan jumlah bahan genetik patogen. Menggunakan alat khas, beberapa kitaran pemanasan dan penyejukan dijalankan. Kemudian bahan itu dianalisis dan dibandingkan dengan gen yang diketahui virus, berdasarkan kesimpulan dibuat tentang kehadiran atau ketiadaan jangkitan.

    Jenis analisis PCR untuk hepatitis C

    Terdapat tiga jenis analisis PCR:

    1. Analisis kualitatif PCR. Tahap pertama kajian ini. Ia membolehkan anda mengenal pasti bahan genetik virus dalam darah.

  • Analisis kuantitatif PCR. Membolehkan anda untuk menentukan beban virus - kepekatan bahan genetik patogen dalam satu mililiter darah. Kajian ini dilakukan sebelum permulaan terapi, dan kemudian pada pertama, keempat, kedua belas, dan (jika kursus itu panjang) minggu ke-24 rawatan untuk menilai keberkesanannya.

  • Genotyping Agen penyebab hepatitis C sering dan mutasi mutasi. Terdapat tujuh varian genotip virus yang terdapat di planet ini. Di Rusia, jenis pertama, kedua dan ketiga adalah perkara biasa. Setiap genotipe mempunyai ketahanan yang berbeza terhadap terapi, contohnya, keberkesanan rawatan jenis pertama adalah enam puluh peratus, dan untuk kedua dan ketiga angka ini mencapai delapan puluh lima. Oleh itu, untuk memilih ubat-ubatan yang sesuai dan menetapkan kursus rawatan untuk tempoh yang mencukupi, adalah perlu untuk menentukan dengan tepat jenis virus pesakit yang dijangkiti.
  • Petunjuk untuk analisis PCR untuk hepatitis C

    Kajian PCR ditetapkan dalam kes berikut:

    • hubungan dengan orang yang sakit di mana jangkitan boleh berlaku;
    • enzim positif immunoassay;
    • tanda-tanda sirosis: perubahan saiz hati, pembesaran limpa, penampilan pada abdomen dari plexus vena kulit subkutan;
    • penampilan gejala kerosakan hati: sakit di perut kanan, menguning kulit;
    • peningkatan aktiviti ALT dan AST dalam analisis biokimia darah;
    • sebelum memulakan rawatan untuk menentukan viral load;
    • untuk memantau keberkesanan terapi antiviral;
    • selepas rawatan untuk mengawal berulang;
    • di hadapan didiagnosis hepatitis B, untuk mengecualikan kerosakan hati yang bercampur.

    Penjelasan kajian PCR mengenai hepatitis C

    Penyahkodan analisis PCR dan immunoassay enzim untuk hepatitis C perlu dilakukan oleh pakar hepatologi atau pakar penyakit berjangkit. Menganalisis keputusan PCR diperlukan dalam kombinasi dengan data analisis biokimia darah, biopsi dan ultrasound. Hanya doktor yang berkelayakan sahaja yang dapat menganalisis hasil penyelidikan dan, berdasarkan kepada mereka, menetapkan rawatan yang betul.

    Menyahkod analisis kualitatif.

    Dalam bahan biologi yang dianalisis mendapati bahan genetik patogen. Jangkitan disahkan.

    Jangkitan tidak ada, atau jumlah RNA patogen berada di bawah batas kepekaan.

    Menyahkod analisis kuantitatif.

    Kadar biasa untuk orang yang sihat. Ini bermakna bahawa tiada RNA hepatitis C dalam bahan di bawah kajian, atau tumpuannya adalah di bawah ambang sensitiviti kajian.

    Kepekatan RNA adalah di bawah julat kuantifikasi. Hasil ini ditafsirkan dengan berhati-hati, menghubungkannya dengan data dari kajian lain, sering kali dikaji semula.

    Tahap viral load pada kepekatan tertentu dianggap rendah. Biasanya, penurunan dalam jumlah virus bermakna terapi berjaya.

    Lebih daripada 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Tahap viral load pada kepekatan tertentu dianggap tinggi.

    Lebih daripada 2.4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Jumlah RNA adalah di atas batas atas rentang kuantifikasi. Tidak mustahil untuk membuat kesimpulan mengenai tahap beban virus dengan hasil ini. Biasanya dalam kes sedemikian, ujian diulang dengan pengenceran sampel darah.

    Menyahkod genotip.

    RNA dikesan genotip tertentu

    Virus Hepatitis C genotip dan subjenis tertentu dikesan dalam biomaterial. Hasilnya dikodkan dalam angka Roman dan huruf Latin, misalnya - 1a, 2b. Secara keseluruhan terdapat tujuh genotip dan enam puluh tujuh subtipe, namun, di Rusia terdapat hanya tiga jenis pertama.

    RNA virus Hepatitis C dikesan

    RNA ditemui dalam darah genotip langka untuk Rusia, yang tidak boleh dikaitkan dengan jenis pertama, kedua, atau ketiga. Lebih banyak penyelidikan diperlukan.

    Keputusan ini menunjukkan bahawa pesakit sihat, atau jumlah RNA patogen terlalu kecil.

    Ia adalah mungkin bahawa analisis PCR untuk hepatitis C adalah negatif, dan enzim imunosorben berkaitan enzim mengenal pasti antibodi terhadap virus. Ini bermakna bahawa pesakit mempunyai hepatitis C akut dan pulih sendiri. Kira-kira dua puluh kes jangkitan mengakibatkan pemulihan spontan jika badan pesakit mempunyai daya tahan yang cukup terhadap jangkitan.

    Walaupun PCR adalah ujian yang sangat tepat, hasilnya mungkin diputarbelitkan dalam situasi berikut:

    • darah itu diangkut ke makmal dalam keadaan yang tidak sesuai, suhu telah dilanggar;
    • sampel biomaterial tercemar;
    • terdapat kesan sisa heparin dan antikoagulan lain dalam darah;
    • Penyiasat didapati sebagai inhibitor - bahan yang melambatkan atau menghentikan tindak balas rantai polimerase.

    Kelebihan PCR berbanding kaedah lain

    1. Diagnosis pada peringkat awal. PCR mengesan bahan genetik agen penyebabnya. Menggunakan analisis immunofluorescence, hanya imunoglobulin yang dapat ditentukan - bahan yang dihasilkan oleh tubuh sebagai tindak balas terhadap jangkitan. Dalam kes jangkitan dengan hepatitis C, selang antara jangkitan dan permulaan tindak balas imun boleh beberapa minggu dan bulan, pada masa ini ELISA akan tidak berkesan. PCR akan memberi jawapan pada minggu pertama selepas jangkitan.

  • Kebarangkalian kebarangkalian rendah. Dalam bahan di bawah kajian, menentukan kawasan bahan genetik, yang merupakan ciri hanya satu jenis patogen. Ini menghapuskan hasil palsu. Apabila ralat ELISA adalah mungkin, kerana jenis antibodi yang sama boleh dibebaskan terhadap virus yang berlainan - antibodi tersebut dipanggil cross-antibodi.

  • Kepekaan yang tinggi. PCR memungkinkan untuk mengesan RNA agen penyebab walaupun dalam kuantiti minimum. Hal ini memungkinkan untuk mengenal pasti jangkitan tersembunyi.
  • Bagaimana untuk menyediakan derma darah untuk kajian PCR

    Untuk analisis PCR hepatitis C, darah vena dikumpulkan. Biasanya, dua bahagian darah diambil dari urat pesakit pada satu masa: pertama dihantar untuk PCR dan yang kedua oleh ELISA. Ini dilakukan untuk lebih tepat menilai berapa pesakit dijangkiti virus, dan bagaimana kekebalan melawannya.

    Biasanya pesakit dikehendaki mematuhi peraturan berikut:

    • ujian darah diambil pada waktu pagi;
    • Jeda antara makanan terakhir dan derma darah hendaklah lapan hingga sepuluh jam;
    • dua atau tiga hari sebelum analisis, adalah perlu untuk meninggalkan makanan goreng dan lemak, dan alkohol;
    • selama dua puluh empat jam sebelum analisis, pesakit harus menghindari usaha fizikal: jangan membawa beban, jangan pergi ke gim atau kolam renang.

    Apakah RNA Hepatitis C?

    Kajian RNA virus hepatitis C adalah prosedur yang paling penting, yang membolehkan anda menetapkan tempoh dan kaedah rawatan pesakit dengan ketepatan yang tinggi. Diagnosis penyakit ini terdiri daripada beberapa ujian darah yang berbeza, seperti:

    • penanda hepatitis C (anti-HCV);
    • penentuan RNA virus hepatitis C (RNA HCV).

    Kajian pertama dilakukan pada kecurigaan pertama mengenai hepatitis. Pilihan kedua adalah yang paling penting dalam rawatan RNA HCV, jadi pertimbangkannya dengan lebih terperinci.

    Apakah hepatitis C virus?

    Hepatitis C virus, atau HCV, adalah penyakit berjangkit yang menjejaskan hati. Jangkitan dengan virus berlaku melalui darah. Anda boleh dijangkiti dengan melakukan pemindahan darah, apabila peraturan untuk mensterilkan instrumen perubatan tidak diikuti. Kurang kerap terdapat kes-kes apabila penyakit itu diperolehi secara seksual atau dari seorang ibu hamil kepada janin. Hepatitis C boleh terdiri daripada 2 jenis.

    Hepatitis C kronik adalah yang paling berbahaya. Ia adalah satu bentuk penyakit yang boleh bertahan seumur hidup. Ia membawa kepada masalah yang serius dalam fungsi hati, seperti sirosis atau kanser. Dalam 70-90% orang yang dijangkiti, penyakit itu menjadi kronik.

    Bahaya hepatitis C yang paling penting ialah ia berjalan secara rahsia, tanpa tanda-tanda icterik. Pada masa yang sama, mereka sering mengadu demam, mual dan muntah, kelemahan fizikal, peningkatan keletihan, hilang selera dan berat badan. Pada masa yang sama, pada latar belakang pengerasan tisu hati yang kecil, kemerosotan ganasnya sering berlaku. Atas sebab ini, hepatitis C virus sering dipanggil "bom masa" atau "pembunuh penyayang."

    Satu lagi ciri penyakit ini adalah perkembangan yang sangat perlahan, dianggarkan dalam berpuluh-puluh tahun.

    Sebagai peraturan, mereka yang dijangkiti tidak merasakan apa-apa gejala dan tidak menyedari keadaan sebenar mereka. Sering kali, penyakit hanya dapat dikesan dengan menghubungi doktor mengenai subjek lain.

    Pada risiko termasuk:

    • kanak-kanak yang menerima virus hepatitis C daripada ibu mereka;
    • penagih;
    • orang yang menusuk bahagian badan atau tatu dengan instrumen yang tidak steril;
    • menerima darah atau organ penderma (sehingga 1992, apabila hemodialisis tidak dilakukan);
    • orang yang dijangkiti HIV;
    • kakitangan perubatan bersentuhan dengan pesakit yang dijangkiti.

    Penentuan RNA Hepatitis C

    RNA virus Hepatitis C, yang juga dipanggil Hepatitis C PCR, merupakan kajian bahan biologi (darah), yang boleh digunakan untuk menentukan kehadiran secara langsung genomaterial virus hepatitis itu sendiri dalam badan (sebarang virus tunggal adalah RNA tunggal).

    Kaedah ujian utama adalah PCR, atau kaedah tindak balas rantai polimerase.

    Terdapat dua jenis ujian darah untuk RNA HCV:

    Ujian kualiti

    Mengendalikan analisis kualitatif membolehkan menentukan sama ada virus itu ada di dalam darah. Semua pesakit yang telah dijumpai antibodi C-hepatitis mesti lulus ujian ini. Menurut hasilnya, anda boleh mendapat 2 jawapan: virus "hadir" atau "tidak hadir". Dengan hasil ujian yang positif (dikesan), seseorang boleh menilai pembiakan aktif virus yang menjangkiti sel-sel yang sihat di hati.

    Ujian yang dijalankan pada PCR berkualiti tinggi disesuaikan dengan sensitiviti tertentu, dari 10 hingga 500 IU / ml. Sekiranya virus hepatitis dikesan dalam darah dengan kandungan tertentu kurang daripada 10 IU / ml, pengesanan virus mungkin menjadi mustahil. Kandungan virus tertentu yang sangat rendah diperhatikan di kalangan pesakit yang mana terapi antivirus telah ditetapkan. Oleh itu, adalah penting bahawa kepekaan sistem perubatan adalah tinggi untuk mendiagnosis dan menetapkan keputusan kualitatif dalam reaksi rantai polimerase.

    Seringkali, tindak balas rantai polimerase C-hepatitis dilakukan dengan serta-merta selepas mencari antibodi yang sepadan. Ujian berikutnya, semasa laluan terapi antiviral, dijalankan pada minggu ke-4, ke-12 dan ke-24. Dan analisis lain selepas penamatan HTP dilakukan selepas 24 minggu. Kemudian - sekali setahun.

    Ujian kuantitatif

    Analisis kuantitatif PCR RNA, yang kadang-kadang dipanggil viral load, menentukan kepekatan (kandungan spesifik) virus dalam darah. Dalam erti kata lain, beban virus ditakrifkan sebagai jumlah tertentu RNA virus, yang boleh dalam jumlah tertentu darah (biasa digunakan 1 ml, sama dengan 1 cm dalam kiub). Unit untuk hasil ujian adalah unit antarabangsa (standard) dibahagikan dengan satu mililiter (IU / ml). Kandungan virus kadangkala muncul secara berbeza, ia bergantung kepada makmal di mana penyelidikan sedang dijalankan. Untuk hepatitis C, penentuan kuantitatif kadangkala menggunakan nilai seperti salinan / ml.

    Anda harus memahami bahawa tidak ada ketergantungan khusus dalam keparahan C-hepatitis pada kepekatan ketegangan ini dalam darah.

    Semak "pemuatan virus" membolehkan anda menentukan tahap penyakit menular. Oleh itu, risiko menjangkiti orang lain dengan virus meningkat dengan peningkatan kepekatan hepatitis dalam darah. Di samping itu, kandungan virus yang tinggi akan mengurangkan kesan rawatan. Oleh itu, beban virus yang rendah adalah faktor yang sangat baik untuk rawatan yang berjaya.

    Di samping itu, ujian hepatitis C dan penentuannya oleh PCR memainkan peranan yang besar dalam penerapan terapi untuk penyakit ini dan menentukan kejayaan rawatan. Berdasarkan keputusan ujian, kursus pemulihan dirancang. Sebagai contoh, jika kepekatan spesifik virus hepatitis terlalu perlahan, terapi antiviral berpanjangan, dan sebaliknya.

    Dalam perubatan moden, dipercayai bahawa beban lebih daripada 800000 ME / ml adalah tinggi. Beban melebihi 10,000,000 ME / ml dianggap kritikal. Tetapi pakar dari negara-negara yang berbeza masih tidak mempunyai pendapat yang sama mengenai had virus.

    Kekerapan ujian kuantitatif

    Secara umum, analisis kuantitatif hepatitis dilakukan sebelum terapi antiviral dan 3 bulan selepas berakhirnya prosedur perubatan untuk menentukan kualiti terapi yang dilakukan.

    Akibatnya, ujian kuantitatif akan dianggap sebagai penilaian kuantitatif bagi hasil bagi sampel yang dinyatakan di atas. Akibatnya, keputusan "di bawah julat yang diukur" atau "tidak dikesan dalam darah" akan dikeluarkan.

    Parameter kepekaan ujian kualitatif biasanya lebih rendah daripada kepekaan analisis kuantitatif. Transkrip "Hilang" menunjukkan bahawa kedua-dua jenis pemeriksaan tidak menemui RNA virus. Apabila indeks ujian adalah "di bawah jangkauan yang diukur," analisis jenis kuantitatif kemungkinan besar tidak mendapati RNA hepatitis, walaupun ini mengesahkan kehadiran virus dengan kandungan khusus yang sangat kecil.

    Hepatitis C dan genotipnya

    Genotip RNA virus Hepatitis C mendiagnosis kehadiran jenis genetik yang berbeza dari hepatitis C. Lebih daripada 10 jenis genom virus diketahui sains, tetapi untuk amalan perubatan, ia mencukupi untuk membezakan beberapa genotip yang mempunyai bahagian terbesar di rantau ini. Menentukan jenis genetik memainkan peranan penting dalam memilih masa rawatan, yang sangat perlu jika anda mengambil kira pelbagai kesan sampingan ubat untuk hepatitis.

    Kaedah rawatan hepatitis C virus

    Satu-satunya cara yang berkesan untuk menyembuhkan virus hepatitis, sebagai peraturan, adalah gabungan 2 ubat: interferon-alpha bersama-sama dengan ribavirin. Secara individu, ubat ini tidak berkesan. Dos ubat yang disyorkan dan masa penggunaan perlu ditetapkan hanya oleh doktor dan secara individu untuk setiap pesakit. Rawatan dengan ubat-ubatan ini boleh mengambil masa 6 hingga 12 bulan.

    Hari ini tidak mencipta ubat yang menjamin seratus peratus pemulihan daripada virus itu. Walau bagaimanapun, dengan rawatan yang betul, penyembuhan pesakit boleh mencapai sehingga 90% daripada jumlah kes.

    Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

    Hepatitis adalah penyakit serius yang mempunyai banyak sebab. Asas pembangunannya adalah kerosakan langsung atau tidak langsung kepada hati. Memandangkan kepentingannya untuk seluruh organisma, seseorang hanya boleh meneka betapa sukarnya patologi itu. Dalam artikel ini kita akan mengkaji secara terperinci ciri-ciri kursus dan diagnosis makmal hepatitis C.

    Penyebab penyakit itu adalah agen virus yang merujuk kepada patogen yang mengandungi RNA. Ia mempunyai ciri tersendiri - keupayaan untuk bermutasi, iaitu mengubah strukturnya. Disebabkan ini, jangkitan itu melarikan diri daripada serangan sistem imun dan dalam kebanyakan kes menyebabkan keradangan kronik di hati.

    Memandangkan kewujudan subtipe yang berlainan virus, pemilihan ubat-ubatan harus berdasarkan hasil genotip. Walaupun kajian lama penyakit dan struktur HCV, belum ada kemungkinan untuk mengembangkan vaksin tertentu untuk penyakit ini.

    Kesukaran diagnosis awal terletak pada kursus asimtomatik hepatitis, akibatnya seseorang melawat doktor pada tahap sirosis. Untuk mengesan penyakit itu dalam masa, pemeriksaan perubatan yang kerap diperlukan. Hanya dengan ujian makmal darah adalah mungkin untuk mengesan HCV dan mencegah pencemaran orang lain. Hakikatnya ialah pembawa jangkitan itu boleh lama tidak meneka tentang patologi dan terus menghantar virus kepada orang yang sihat.

    Cara penghantaran

    Dalam kebanyakan kes, virus merebak melalui darah, kerana ia mengandungi kepekatan tertinggi agen patogenik. Oleh itu, jangkitan disebarkan:

    • dengan hemodialisis;
    • dengan jarum yang dijangkiti;
    • dalam proses berperang, apabila kulit cedera, dan kontak darah berlaku;
    • dengan pemindahan darah (transfusi darah).

    Kebarangkalian jangkitan semasa keintiman tidak signifikan, kerana air mani dan pelepasan vagina mengandungi sejumlah kecil patogen. Risiko jangkitan meningkat dengan ketara sebagai melanggar integriti membran mukus alat kelamin. Ini diperhatikan dengan seks yang agresif dan dubur.

    Bagi mod penghantaran menegak, ia dijalankan dalam proses buruh. Dalam tempoh kehamilan janin, patogen tidak boleh menembusi plasenta ke embrio. Dalam kelahiran semulajadi, agen patogenik ditularkan kepada kanak-kanak apabila kulit cedera, apabila hubungan dengan darah ibu diperhatikan.

    Selepas penembusan patogen ke dalam organisma yang sihat, sintesis antibodi bermula, yang merupakan perlindungan daripada jangkitan dan kepunyaan struktur imun. Mereka didapati dalam kajian awal seseorang yang menggunakan ELISA.

    Tindak balas rantai polimer dilakukan untuk mengesahkan diagnosis pesakit. Ia adalah analisis bahan genetik agen patogen dan penentuan beban virus.

    Diagnosis makmal hepatitis C

    Diagnosis makmal bermula dengan enzim immunoassay. Tugas utamanya adalah untuk mengesan antibodi yang dihasilkan terhadap patogen. Keberkesanannya adalah hampir 95%. Terima kasih kepada penyelidikan ini, adalah mungkin untuk mengenal pasti pembawa virus di peringkat praplinikal dan hantar untuk pemeriksaan lanjut.

    Analisis kualitatif ELISA menunjukkan kehadiran atau ketiadaan imunoglobulin dalam darah pesakit. Hasilnya mungkin "positif" atau "negatif." Setelah menerima jawapan pertama, orang itu dihantar untuk pemeriksaan seterusnya - PCR. Harganya bergantung kepada kualiti reagen dan makmal. Kos tindak balas rantai polimerase dapat mencapai 4 ribu rubel.

    Ciri PCR

    Menggunakan tindak balas rantai polimerase, walaupun sedikit bahan biologi membolehkan kita untuk menganggarkan beban virus dalam darah, iaitu, untuk mengira kepekatan patogen dalam satu mililiter cecair.

    Dengan kemunculan PCR, diagnosis hepatitis telah menjadi lebih mudah. Analisis ini memungkinkan untuk mengenal pasti RNA HCV, untuk menubuhkan tahap proses menular dan penyebaran virus pembawa.

    Terdapat beberapa jenis diagnosis genetik:

    1. Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C - mengesahkan kehadiran atau ketiadaan HCV dalam darah subjek:
    2. kuantitatif, yang mana anda boleh mengira kepekatan virus dan menubuhkan tahap penyakit. Hasilnya diberikan dalam IU / ml atau salinan / ml (bergantung kepada makmal);
    3. genotip - diperlukan untuk menentukan genotip HCV. Ini diperlukan untuk pilihan ubat yang paling berkesan dalam kes ini. Analisis secara tidak langsung menunjukkan keparahan proses patologi di hati. Oleh itu, dengan genotip ketiga patogen, steatosis paling sering diperhatikan, asasnya adalah pengumpulan lemak dalam hepatosit (sel-selnya). Di samping itu, jenis virus menjejaskan hasil dan tempoh kursus terapeutik.

    Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

    Pertama sekali, bahan biologi diperiksa di makmal untuk kehadiran RNA HCV. Adalah penting untuk diingat bahawa analisis kualitatif terhadap hepatitis C mempunyai tahap kepekaan tertentu, dan oleh itu mungkin tidak selalu memberi jawaban yang tepat. Dalam kes ini, disyorkan untuk menjalankan semula diagnostik makmal dengan menggunakan reagen lain.

    Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, sistem ujian dengan kepekaan sekurang-kurangnya 50 IU / ml harus digunakan.

    Hasil diagnostik boleh sama ada "positif" atau "negatif". Jika patogen tidak terdapat dalam darah, kajian itu selesai. Jika agen patogenik dikesan dalam sampel, maka beban virus dikuantifikasi.

    Satu tindak balas negatif palsu diperolehi apabila proses teknologi dilanggar, sebagai contoh, komponen aktif yang menekan pembinaan salinan patogen yang memasuki medium. Oleh itu, tidak mungkin untuk memaparkan gambar darah yang benar, sebab itu jangkitan seseorang tidak didiagnosis.

    Hasil positif palsu boleh diperolehi jika tiub untuk pengumpulan bahan biologi, serta persekitaran untuk kajian tersebut tercemar. Di samping itu, respons analisa seperti itu boleh dilakukan dengan jangkitan campuran, apabila hati terjejas oleh beberapa virus, contohnya, hepatitis C dan D.

    Petunjuk untuk penyelidikan kualitatif

    Doktor boleh menetapkan pesakit kajian kualitatif mengenai pengenalpastian RNA virus hepatitis C:

    • setelah menerima tindak balas immunoassay enzim positif atau meragukan;
    • untuk pengesahan diagnosis;
    • menentukan viral load;
    • menetapkan peringkat penyakit;
    • diagnosis jangkitan bercampur. Hepatitis C sering menjangkiti hati secara bersamaan dengan virus "D";
    • penentuan taktik terapeutik dengan mempertimbangkan genotip agen penyebab;
    • menilai dinamika perubahan semasa rawatan dengan ubat-ubatan antiviral.

    Kelebihan reaksi polimerase termasuk:

    1. sensitiviti tinggi teknik, yang membolehkan untuk menubuhkan fakta jangkitan pada peringkat praslinik;
    2. pengenalpastian bahan genetik patogen, dan bukan antibodi;
    3. kemungkinan menubuhkan subjenis daripada agen patogenik;
    4. kelajuan diagnostik yang tinggi, kerana ia tidak memerlukan pembenihan bahan pada medium nutrien, dan cukup untuk menggunakan sistem ujian tertentu. Seseorang menerima keputusan selepas 5 jam;
    5. serba boleh. Analisis ini membolehkan untuk mengenal pasti sebarang bahan genetik (RNA, DNA). Oleh kerana itu, doktor dapat mengesahkan hepatitis C dan jenis penyakit lain (B);
    6. keupayaan untuk mengesan jangkitan laten.

    Penyelidikan kuantitatif

    Dalam kajian darah menggunakan tindak balas rantai polimerase dapat menghitung jumlah patogen dalam jumlah tetap bahan biologi. Penunjuk ditunjukkan dalam IU / ml. Melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan tahap penularan pesakit, menentukan tahap proses menular, dan juga menilai keberkesanan terapi dadah.

    Atas dasar PCR, pakar memutuskan bahawa dos ubat dapat menghalang pembiakan patogen. Di samping itu, tempoh rawatan dan prognosis antiviral untuk jangka hayat ditentukan. Adalah penting untuk diingat bahawa sistem ujian mempunyai kepekaan yang tinggi, jadi kaedah ini memungkinkan untuk mengesahkan jangkitan seseorang di peringkat praslinik.

    Genotyping

    Memandangkan keupayaan patogen untuk bermutasi, genotipnya diperlukan untuk menentukan taktik rawatan dan pilihan ubat antiviral. Sebagai contoh, rawatan hepatitis B HCV 1 berlangsung selama 48 minggu, dengan trend positif diperhatikan hanya dalam 60% kes. Genotip 2 dan 3 mempunyai prognosis yang lebih baik. Ubat antiviral ditetapkan selama 8 bulan, dan keberkesanannya mencapai 85%.

    Menurut statistik, dalam kebanyakan kes, HCV 1, 2 dan 3 didaftarkan di Persekutuan Rusia.

    Apabila menguraikan ujian makmal, jawapan ini boleh ditunjukkan - "tidak ditaip". Ini bermaksud bahawa virus beredar dalam sistem peredaran pesakit dan tidak boleh diiktiraf oleh sistem ujian. Hasil analisis dalam hal ini menunjukkan bahwa patogen tidak tipikal untuk kawasan geografis tertentu.

    Bagaimana untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai?

    Untuk kajian kualitatif PCR untuk mengesan RNA agen penyebab hepatitis C menunjukkan keputusan yang betul, adalah perlu untuk mematuhi keperluan untuk menyediakan diagnostik makmal:

    1. pensampelan darah dijalankan pada perut kosong, dan jurang "lapar" tidak sepatutnya lebih pendek daripada 8 jam;
    2. dua hari sebelum kajian, disyorkan untuk berhenti meminum minuman beralkohol dan meninggalkan masakan pedas, berlemak dan asap;
    3. membatalkan pengenalan dadah yang mengurangkan pembekuan darah, misalnya, heparin. Sekiranya ubat-ubatan ini ditetapkan untuk tujuan kesihatan, anda mesti memberitahu doktor. Di samping itu, pakar perlu menyedari pengambilan ubat lain yang boleh menjejaskan hasil penyelidikan makmal;
    4. Pada malam pengumpulan bahan biologi, prosedur physiotherapeutic tidak boleh dijalankan dan tidak boleh dikenakan tenaga fizikal yang teruk.

    Hasil analisis dapat dipengaruhi bukan hanya oleh orang yang menyumbangkan darah, tetapi juga oleh faktor-faktor lain, yaitu:

    • pensampelan darah berkualiti rendah;
    • tidak mematuhi saranan pengangkutan bahan biologi;
    • latihan pekerja makmal yang tidak mencukupi;
    • tidak mematuhi teknik penyelidikan;
    • pengenalan antikoagulan (heparin) pada malam pensampelan darah. Kumpulan ubat ini mengurangkan pembekuan, sekali gus memperlahankan kerja reagen.

    Di makmal yang berlainan, tindak balas diagnostik mungkin berbeza sedikit, tetapi kesilapan ini tidak menjejaskan hasil akhir kajian.

    Perhatian khusus diberikan kepada jenis sistem ujian yang digunakan di makmal. Selalunya keutamaan diberikan kepada reagen dengan sensitiviti yang tinggi. Ini adalah penting untuk pesakit yang mempunyai viral load yang rendah, kerana ia sukar untuk dikesan.

    Berapa kerapkah ujian makmal dilakukan?

    Reaksi rantai polimer primer dilakukan pada orang yang telah dikesan oleh antibodi immunoassay kepada patogen hepatitis. Dalam kes ini, ia ditugaskan untuk mengesahkan fakta jangkitan seseorang dan menubuhkan tahap penyakit. Di samping itu, analisis ini membolehkan untuk menentukan subtipe virus, yang sangat penting untuk pilihan ubat-ubatan.

    Tempoh berikutnya untuk ujian makmal wajib adalah 3 bulan dari permulaan terapi antiviral. Diagnostik memungkinkan untuk menilai keberkesanan ubat-ubatan, laraskan dos atau menggantikannya.

    Sebagai tambahan kepada ujian asas, PCR boleh dilakukan pada 4 dan 24 minggu dari permulaan rawatan. Prognosis positif penyakit ini disahkan oleh penurunan dalam viral load selepas tiga bulan terapi. Sebagai contoh, ia harus berkurang dari 1 juta IU / ml kepada beberapa ratus ribu.

    Sekiranya kepekatan agen patogenik dalam darah kekal pada tahap yang sama atau bertambah sedikit, ini menunjukkan keberkesanan ubat-ubatan antiviral dan memerlukan penggantiannya. Menggunakan PCR pada akhir rawatan, adalah mungkin untuk mengesahkan pemulihan pesakit.

    Untuk menerangkan dengan betul hasil diagnostik makmal, perundingan pakar hepatologi atau pakar penyakit berjangkit diperlukan. Memandangkan frekuensi tinggi tindak balas palsu dalam ELISA, analisis ini digunakan secara eksklusif untuk pemeriksaan awal. Untuk pemeriksaan yang lebih menyeluruh pesakit yang menggunakan reaksi rantai polimerase.

    Adakah mungkin untuk menyembuhkan hepatitis C tanpa kesan sampingan?

    Hari ini, ubat-ubatan moden dari generasi baru Sofosbuvir dan Daclatasvir mungkin menyembuhkan hepatitis C untuk 97-100%. Anda boleh mendapatkan ubat-ubat terbaru di Rusia dari wakil rasmi gergasi farmaseutikal India, Zydus Heptiza. Ubat yang diperintahkan akan dihantar melalui kurier dalam tempoh 4 hari, pembayaran selepas penerimaan. Dapatkan konsultasi percuma mengenai penggunaan ubat-ubatan moden, serta belajar tentang cara memperoleh, anda boleh di laman web rasmi pembekal Zydus di Rusia.


    Artikel Yang Berkaitan Hepatitis